检测已经建立的非小细胞肺癌放射抗拒细胞系的放射敏感性。 点击此处 2.初步探讨PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂LY294002和Rapamycin对大分割放疗的增敏作用。 方法： 1.体外培养A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞。3种细胞均接受射线照射,克隆形成实验检测照射后3种细胞增殖能力的差异；免疫荧光实验检测3种细胞放疗后24h残留的yH2AX焦点的差异。 2.体外培养A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞。实验分组：对照组(A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞)、LY294002组、Rapamycin组、LY294002+Rapamycin组,给予相应的射线照射。通过克隆形成实验检测加入抑制剂LY294002和／或Rapamycin后大分割放疗抗拒细胞放疗后的增殖能力；通过免疫荧光实验检测加入抑制剂LY294002和／或Rapamycin后大分割放疗抗拒细胞24h后的yH2AX焦点数。应用SPSS17.0统计分析软件包,实验数据以均数±标准差(x士S)表示,在检验数据正态分布及方差齐性的条件下,多组间数据比较采用方差分析,各组组间差异的比较用LSD—t检验。以P值<0.05),单抑制剂组与A549对照组相比未见明显差异,而双抑制剂组较A549组明显增加(P
目的：
观察5-aza-CdR对HepG2细胞增殖及Bax基因表达的影响，并探讨其与Akt表达的相关性，为肝癌的防治提供理论依据。 方法： 取浓度分别为0μmol/L、0.4μmol/L、1.6μmol/L、6.4μmol/L、25.6μmol/L和102.4μmol/L的5-aza-CdR处理HepG2细胞，5-aza-CdR作用24h、48h和72h后，用相差显微镜观察不同药物浓度和时间段的HepG2细胞形态学改变；采用MTT法检测5-aza-CdR对HepG2细胞的增殖抑制率；采用RT-PCR法和Westernblot法检测5-Aza-CdR对Akt、Bax mRNA和蛋白表达的影响。 结果： 1、 MTT法检测结果显示，与对照组比较，5-aza-CdR处理组的HepG2细胞增殖抑制率显著性增加，呈时间和浓度依赖性（均P
[目的]探索趋化因子Mig介导口腔舌鳞癌Tca8113细胞耐热的作用及相关分子机制。
[方法](1)Tca8113细胞常规培养后,分组处理：Mig处理组(100nM Mig因子处理Tca8113细胞6h),Mig+Akt抑制剂组(100nM Mig+12nM Akt抑制剂MK-2206同时处理Tca8113细胞6h),热诱导组(43℃80min水浴加热处理Tca8113细胞),Mig+热诱导组(100nM GDC-0941 价格 Mig处理Tca8113细胞6h后,43℃80min水浴加热处理Tca8113细胞),Mig+Akt抑制剂+热诱导组(100nM
Mig+12nM Akt抑制剂MK-2206同时处理Tca8113细胞6h后,43℃80min水浴加热处理Tca8113细胞)。(2) Full moon PCS248磷酸化蛋白芯片杂交技术检测Tca8113细胞及Mig处理组、热诱导处理组和Mig+热诱导处理组Tca8113细胞相关蛋白磷酸化水平,差异比较,行相关信号通路分析。(3)倒置显微镜观察各组细胞形态变化。(4)TUNEL标记流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。(5)流式细胞仪检测活化Caspase-3在各组活细胞中的比值及线粒体膜电位。(6)免疫印迹进一步验证分析相关信号通路蛋白磷酸化水平变化。(7)采用SPSS17.0统计软件对数据进行统计学分析。 [结果](1)Full moon PCS248磷酸化蛋白芯片杂交检测发现,热诱导处理Tca8113细胞后,5种蛋白磷酸化水平明显升高(升高2倍以上)；6种蛋白磷酸化水平明显降低(降低0.6倍以上)。有意义的是,细胞存活关键因子Akt2(Phospho-Ser474)及其下游信号通路转录因子eIF4E(Phospho-Ser209)磷酸化水平同时降低,而Mig预处理后再热诱导,两者磷酸化水平无明显降低。(2)热诱导处理Tca8113细胞24h后,细胞出现明显的凋亡形态学改变,Mig预处理后,其细胞凋亡数量明显减少,采用Akt抑制剂MK-2206联合处理后,Tca8113细胞凋亡数量明显恢复。(3) Everolimus厂商 TUNEL标记流式细胞仪检测细胞凋亡率,发现热诱导处理后Tca8113细胞凋亡率由(2.77±0.47)%升高至(33.97±1.08)%(p=0.000), Mig+热诱导联合处理后细胞凋亡率降至(17.78±2.1)%, Mig+Akt抑制剂+热诱导联合处理后细胞凋亡率恢复为(25.43±0.77)%。(4)热诱导处理后活化的Caspase-3在所有细胞中的比值由(10.93±1.17)%升高至(49.73±2.04)%(p=0.000), Mig+热诱导联合处理后降至(30.90±2.42)%,Mig+Akt抑制剂+热诱导联合处理后恢复为(44.53±1.59)%。(5)热诱导处理后Tca8113细胞JC-1单体含量由(10.3±0.92)%升高为(30.5±2.86)%(p=0.