测序结果显示,FpgMBV1-P3蛋白的编码序列长2 700 bp,编码901个氨基酸残基。构建原核表达载体pET28a-FpgMBV1-P3并转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,在25℃以0.5 mmol·L~(-1) IPTG诱导表达重组蛋白。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子量约为90 kDa,与预期分子BAY 1895344分子量量大小相符。将该重组蛋白作为抗原免疫日本大耳白兔,获得抗血清,采用间接ELISA测定其效价达1∶128 000,能够特异性检测到假禾谷镰孢菌菌丝中的FpgMBV1-P3蛋白。研究结果可为探究FpgMBV1-P3的结构和功能,以及进一步探讨FpgMBV1在假禾谷镰孢菌弱毒菌株FC136-2AGSK2879552分子量中的作用机制奠定基础。
目的制备特异性和灵敏度较高的抗H5亚型禽流感病毒单克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA方法,为进一步研究检测试剂盒提供基础。方法以H5亚型禽流感病毒为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合及杂交瘤细胞筛选,获取抗H5亚型禽流感病毒单克隆抗体,用Ig亚类确认细节ELISA试剂盒鉴定抗体亚类,间接ELISA法检测抗体效价及特异性。HRP标记单抗并建立双抗夹心ELISA检测方法,经方阵试验优化ELISA反应体系。结果获得配对的2株可分泌特异性单抗的阳性细胞株3C9、6F5,腹水抗体效价在1∶105以上,Ig G亚类均为Ig G2a,轻链为κ链。优化的双抗夹心检测体系能检测多种H5亚型禽流感病毒,与H9亚型和H7亚型均无交叉反应。