01)；14d达高峰(P＜0.01)；以后维持在较高水平，至35d仍明显高于A组(P＜0.01)。C组：TGF-β_1 mRNA的表达从1d至35d均较B组减弱(P＜0.05)；但所有时间点仍高于A组(P＜0.05)。 6．治疗前后染毒大鼠肺组织NF-κB活性的动态变化：A组大鼠肺组织NF-κB活性很低。B组大鼠肺组织NF-κB活性1d开始较A组显著升高(P＜0.01)；3d时达高峰(P＜0.01)；7d及14d时仍高于A组(P＜0.01)。C组NF-κB活性较B组明显减弱(P＜0.01)；在1d时最高，以后逐渐下降，在14d时与A组相比无统计学意义(P＞0.05)。 RGFP966小白鼠 7．染毒大鼠肺组织磷酸化p38MAPK蛋白的变化：A组大鼠肺组织磷酸化p38MAPK蛋白表达较少。B组大鼠肺组织磷酸化p38MAPK蛋白1d开始较A组显著升高(P＜0.01)；3d时达高峰(P＜0.01)；以后逐渐下降，21d及以后与A组相比无统计学意义(P＞0.05)。C组磷酸化p38MAPK蛋白表达1d至14d时较B组明显减弱(P＜0.01)；仅1d至7d时高于对照组(P＜0.05)；在14d时与A组相比无统计学意义(P＞0.05)。
结论：应用MT治疗，可明显降低百草枯中毒大鼠血清MDA含量，增加SOD及GSH-Px活力；减轻染毒大鼠肺组织早期的炎性改变及后期的肺纤维化趋势，这可能与MT较强的抗氧化功能以及降低肺组织NF-κB活性，减少TGF-β_1、磷酸化p38MAPK的表达，调节MMPs和TIMPs之间的平衡有密切关系。
第一部分高糖对培养的人脐静脉内皮细胞p38 MAPK信号系统表达的影响 目的:检测高糖对人脐静脉血管内皮细胞系p38MAPK信号系统表达的影响,从而探讨p38MAPK信号系统在高糖诱导糖尿病视网膜血管病变中的作用。 方法:以人脐静脉血管内皮细胞﹙HUVEC﹚为研究对象,模拟糖尿病状态,以高浓度葡萄糖刺激HUVEC,采用RT-PCR、Western-blot法检测细胞中p38MAPK、转化生长因子β2和基质金属蛋白酶活力和蛋白表达情况的变化,电镜观察超微结构及流式细胞仪检测细胞周期的变化。 结果:高浓度葡萄糖可使内皮细胞中p38MAPK、MMP-2和TGFβ2表达增加,超微结构及细胞周期发生变化。 结论:高糖诱导糖尿病视网膜血管病变可能部分通过p38MAPK信号系统表达增强。 第二部分p38 MAPK信号系统在实验性糖尿病仓鼠视网膜中的表达变化 目的:检测p38 MAPK信号系统在实验性糖尿病仓鼠视网膜中表达的变化,从而探讨p38 MAPK信号系统在糖尿病视网膜病变(diabetic
retinopathy DR)发生发展中的作用及其机制。 方法:用链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)诱导仓鼠糖尿病模型,HE染色观察光镜下视网膜的形态特征及变化,用免疫组织化学法检测正常对照组(非糖尿病动物组)和糖尿病动物模型组视网膜中TGF-β2的表达,电镜观察其超微结构的变化。血清学检测仓鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和电化学发光法检测胰岛素水平等变化。提取视网膜中总RNA,半定量RT-PCR观察视网膜中p38 MAPK、MMP-2和TGFβ2 mRNA表达情况,Western-blot检测糖尿病仓鼠视网膜中p38 MAPK、MMP-2和TGFβ2蛋白情况。 结果:糖尿病仓鼠不仅表现为高血糖,还表现为高TG血症。糖尿病仓鼠视网膜内TGF-β2表达呈阳性染色反应,视网膜超微结构出现膜盘结构分层,数量稀少;节细胞层内质网扩张,核周间隙扩大,细胞内线粒体肿胀等变化。糖尿病仓鼠视网膜中p38 购买ZD6474 MAPK、MMP-2和TGFβ2 mRNA表达呈升高趋势、蛋白表达增多,与正常对照组相比于造模后16周末时即差异具有统计学意义(P < 0.05)。 结论:此为研究p38 MAPK信号途径参与DR的发病机制提供了实验依据。
淋巴细胞作为免疫调节的中心环节,在炎症性肠病的发生和持久化中起重要作用。本课题采用半抗原诱发大鼠结肠炎模型,用蛋白质组学方法研究了淋巴细胞的蛋白表达差异谱。进一步研究了p38
MAPK信号通路在淋巴细胞免疫应答和细胞因子分泌中的作用。同时采用流式细胞术、RT-PCR及ELISA方法对中药肠泰有效部位治疗结肠炎的作用机制进行了研究。结果显示与细胞周期、增殖、信号转导、炎症、凋亡和代谢相关的蛋白分子参与了TNBS诱导的结肠炎中淋巴细胞的免疫应答过程。尤其是一系列与凋亡相关蛋白在结肠炎发病中起重要作用。P38 MAPK通路参与了TNBS诱发的结肠炎中肠系膜淋巴结T淋巴细胞免疫应答,该通路对IL-2、IFN-γ等细胞因子的表达进行了调控。中药复方肠泰有效部位可调节T淋巴细胞亚群比例、降低炎性介质和促炎细胞因子的分泌而发挥对结肠炎的抗炎和免疫调控作用,进而抑制炎症的发生。
近年来的研究证明,在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)的发病初期,病原体及代谢产物(如内、外毒素),尤其是炎症反应早期出现的细胞因子,可激活外源性凝血途径,导致弥漫性血管内凝血(DIC)。同时,疾病早期产生的大量凝血酶可促进血小板和中性粒细胞的聚集、黏附,加强内皮细胞和中性粒细胞之间的相互作用,加重炎症反应。在ALI/ARDS病程中原有的凝血与抗凝、纤溶与抗纤溶、炎症与抗炎之间的平衡被打破,凝血级联与炎症级联之间相互促进,形成一种自动放大的效应,使病情加重,为此干预凝血系统的异常对控制ALI/ARDS的病情发展具有重要意义。另外,ALI/ARDS时炎症反应的失控与p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路及核因子-κB 获悉更多 (NF-κB)的激活密切相关。已有研究证实了肝素除具备抗凝作用外,还有一定的抗炎、抗过敏作用,有关肝素对p38MAPK信号转导通路以及NF-κB活性影响的研究,国内外未见有相关报道。 目的:本实验拟应用目前常用的抗凝药肝素(包括低分子肝素)来治疗ALI/ARDS,同时,通过研究肝素对p38 MAPK信号转导通路及NF-κB活性的影响,进一步明确肝素对ALI/ARDS抗炎作用的分子机制。 方法:本实验采用新西兰大耳白兔48只,动物随机分为4组:对照组(A组)、内毒素组(B组)、内毒素+肝素组(C组)和内毒素+低分子肝素组(D组),每组12只。1.用大肠杆菌内毒素(LPS)制备大耳白兔急性肺损伤模型;2.用Nova Stst Profile M血气分析仪进行血气分析;3.用双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度;4. ELISA法测定血清血管内皮粘附分子-1(sICAM-1)的浓度;5.Western blots检测多形核中性白细胞(PMN)中磷酸化p38 MAPK的含量;6.电泳迁移率变动分析实验(EMSA)测定肺组织中NF-κB活性;7.计算肺干重和湿重比值(肺D/W)及观察肺组织病理学改变。观察肝素对ALI/ARDS的疗效,并通过研究肝素对TNF-α、sICAM-1表达、p38 MAPK基因信号转导通路、NF-κB活性的影响来进一步探讨其抗炎作用的分子机制。 结果: 1.