1% SDS处理下具有较强的存活率,并且相对于空载菌具有显著性差异。在PH=3的7H9培养基里培养时发现与Ms_Vec相比,Ms_Rv1265具有较强的存活率,而在PH=5的条件下,两者没有显著性差异。为了进一步探索Rv1265蛋白的毒力作用,利用Ms_Rv1265和Ms_Vec侵染THP-1细胞和Raw264.7细胞,发现Ms_Rv1265在巨噬细胞内的存活能力相对于Ms_Vec具有显著性提高,LDH释放量检测发现与Ms_Vec相比Ms_Rv1265可以促进THP-1巨噬细胞的裂解。同时提取Raw264.7和THP-1细胞的总RNA,检测相关的细胞因子IL-1β,

IL-6, IL-10, IL-12P40和TNF-a,以及炎症相关的caspase-1和促凋亡因子bcl-rambo的转录水平。发现与Ms_Vec相比Ms_Rv1265侵染后在Raw264.7和THP-1细胞中细胞因子IL-1β,IL-12P40, IL-10和IL-6均上调表达。利用特异性的信号通路抑制剂处理侵染了Ms_Rv1265和Ms_Vec的细胞THP-1,发现NF-κB和1/2ERK途径对于特异性诱导IL-1β, IL-12P40, IL-10和IL-6的上调表达具有非常重要的作用。综上所述,本文主要研究了cAMP应答基因Rv1265的功能,发现与空载菌相比,过表达菌株Ms_Rv1265对胞外压力的耐受能力增强,并通过干扰宿主细胞的细胞因子表达来增强其在巨噬细胞的存活。此外,Rv1265的过表达改变了耻垢分枝杆菌中细胞壁的脂肪酸成分。以上结果表明Rv1265极有可能是结核分枝杆菌的毒力基因,这将为研究结核分枝杆菌与宿主相互作用网络提供了线索。
目的：通过体外细胞实验,探讨HMGB1是否参与调节支气管上皮细胞(16-HBE)分泌哮喘相关炎症因子的病理生理过程,并进一步探讨HMGB1参与上述调控过程的机制。方法：选取16-HBE细胞株进行体外培养,(1)、细胞分组：对照组、HMGB1-100ng/ml、HMGB1-500ng/ml、HMGB1-2000ng/ml,提取上述四组实验细胞的mRNA

很少 (24h)、细胞培养上清(48h)以及细胞裂解液(48h),qPCR和ELISA检测上述样品中TSLP、IL-8、IL-6、EGF、VEGF、MMP-9、 IL-1β、TNF-α炎症因子mRNA及分泌量水平；qPCR和Western blot检测上述细胞分组中RAGE、TLR2、TLR4 mRNA及蛋白表达水平；(2)分别使用拮抗RAGE (20μg/ml). TLR2 (20μg/ml). TLR4 (20μg/ml)的抗体后,用ELISA检测TSLP、IL-8、IL-6、EGF、VEGF、MMP-9、IL-1β、TNF-α的表达变化。(3)、分别用SB202190 Onalespib体内 (10μM)、U0126 (10μM)、LY294002(10μM)抑制p38 MAPK、ERK1/2、PI3K通路后,Western blot检测细胞裂解液中p38、ERK1/2和PI3K蛋白磷酸化情况,ELISA检测细胞上清液中TSLP、IL-8、IL-6、EGF、VEGF、MMP-9、IL-1β、TNF-α分泌量的变化。结果：(1)、HMGB1可增加16-HBE TNF-α、TSLP、MMP-9、VEGF的表达和释放。相对于对照组,HMGB1-500g/ml可明显增加16-HBE TNF-α、 TSLP、MMP-9、VEGF的mRNA表达和蛋白的释放(P0.05)。(2)、HMGB1可增加16-HBE RAGE的表达。相对于对照组,HMGB1-500g/ml明显增加RAGE的mRNA及蛋白的表达(P
目的:蛋白尿是肾脏疾病常见的临床表现之一,其发病机制尚未得到明确,因此也未有针对性药物治疗,p38蛋白激酶是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族成员之一,也是控制炎症反应的最重要成员,可以因高渗,紫外线等而激活。本课题主要是探讨p38蛋白激酶在高盐诱导蛋白尿中的作用,并从体内、体外实验探讨其分子机制。目的就是在了解机体处于疾病状态下高盐诱导蛋白尿的发病机制的基础上研究其靶向治疗药物。方法:1.将ICR小鼠36只(雄性,8-10周)随机分为六组,每组各6只,分别为正常小鼠高盐组,糖尿病小鼠高盐组,糖尿病小鼠对照组,单侧肾脏切除小鼠高盐组,单侧肾脏切除小鼠对照组,单侧肾脏切除小鼠高盐+p38抑制剂(SB202190)组。2.糖尿病小鼠组及单侧肾脏切除小鼠组(1).用1%链脲佐菌素(STZ)给小鼠腹腔注射,剪鼠尾巴测血糖,血糖>16mmol/L,并维持稳定即糖尿病小鼠建模成功,四周后收集尿液。(2).单侧肾脏切除小鼠即采用左侧卧位,切除右侧肾脏。1周后收集尿液。(3).给予4%高盐水喂养糖尿病、单侧肾脏切除高盐组及正常高盐组的小鼠,自由饮。给予无盐水喂养各组对照组小鼠,自由饮,收集六组小鼠饮水12h,24h,36h,48h后的尿液,及停盐水后12h,24h,36h的尿液。3.单侧肾脏切除+p38抑制剂组小鼠在喂养4%高盐水24h后腹腔注射一次p38抑制剂(SB202190),按上述时间点停盐,并收集尿液。4.用考马斯亮蓝G250染色法,Elisa测尿白蛋白。取单侧肾脏切除高盐组及其对照组的脾脏组织,应用PCR技术检测NFAT5和IL-13

Protease Inhibitor Library溶解度 m RNA的表达情况。5.将ICR小鼠随机分组,分为两组,各组6只,一组为正常小鼠组,二组为单侧肾脏切除组。6.分别取出正常小鼠组和单侧肾脏切除组小鼠的脾脏、骨髓组织,分离单个核细胞,设立高盐组、高盐+p38抑制剂组(SB202190)和对照组,予细胞培养。采用PCR技术检测NFAT5和IL-13 m RNA的表达情况。结果:1.考马斯亮蓝染色:糖尿病,单侧肾脏切除小鼠高盐组尿蛋白明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),两种模型的高盐组尿蛋白也明显高于正常小鼠高盐组,差异有统计学意义(P<0.01)。单侧肾脏切除+p38抑制剂组于24h后尿蛋白明显低于单侧肾脏切除高盐组,差异有统计学意义(P0.05)IL-13的表达明显高于单侧肾脏切除对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。2.细胞培养后,PCR:高盐组NFAT5与IL-13明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),高盐+p38抑制剂组NFAT5与IL-13表达明显低于高盐组,差异有统计学意义(P<0.