01),而癌旁组织比远癌组织的表达也有所增加(P<0.05)。MMP-7在肠癌组织的表达较癌旁组织增多,差异显著(P<0.05);MMP-7的mRNA表达在肠癌组织显著高于癌旁组织(P
胃癌是发病率较高的恶性肿瘤,也是导致肿瘤相关死亡的主要病种。胃癌患者中将近20%HER-2表达阳性。HER-2在HER/erb B家族的活化和信号转导中起着重要的作用,参与了肿瘤细胞的增殖、分化、转移和细胞转化,HER-2过表达还与鲍曼分型,淋巴转移,静脉浸润,淋巴管浸润相关,HER-2过表达患者预后往往较差。目前针对HER-2靶向治疗的方法包括单克隆抗体、小分子酪氨酸激酶抑制剂等,都取得了一定的疗效,但同时也出现许多新问题有待解决。
卵巢癌的发生过程中存在磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/m

http://www.selleckchem.cn/products/z-vad-fmk.html TOR)信号通路的激活,该通路的异常激活可促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、促进肿瘤侵袭和转移。PI3K/AKT/m TOR通路靶向抑制剂对卵巢癌显示出一定的疗效,目前该靶向药物的临床试验已开展,并显示出良好的安全性和有效性。针对PI3K/AKT/m TOR的靶向药物将为卵巢癌的治疗指明新方向。
近年来,乳腺癌的分子靶向治疗取得了长足的发展。曲妥珠单抗联合化疗已成为Her-2阳性乳腺癌患者的标准一线治疗。全文从抗Her-2治疗药物,PI3K/AKT/m TOR通路中的抑制剂,抗血管生成治疗药物,针对BRCA1/2突变的PARP抑制剂,细胞周期蛋白依赖性激酶4和6(CDK4/6)抑制剂几个方面就当前乳腺癌分子靶向治疗现状作一综述。
PI3K-AKT-mTOR信号转导通路是哺乳动物肿瘤免疫中重要的信号通路,在多种恶性肿瘤的演变过程中发挥了极其重要的作用。近几年来,随着肿瘤分子生物学的发展,恶性肿瘤的靶向治疗成为研究热点,通过研究探讨PI3K-AKT-mTOR信号通路在肿瘤发生、发展过程中的信号转导机制,联合多种抑制剂或者寻找作用于多种信号通路、多靶点的新药,对于肿瘤的靶向治疗有重要意义。
Glioblastoma

multiforme(GBM),designated as World Health Organization(WHO)grade IV astrocytoma,is a lethal and therapy-resistant brain cancer comprised of several tumor cell subpopulations,including GBM stem cells(GSCs)which are believed to contribute to tumor recurrence following initial response to therapies.Emerging evidence demonstrates Alectinib that GBM tumors are initiated from GSCs.The development and use of novel therapies including small molecule inhibitors of 并且 specific

proteins in signaling pathways that regulate sternness,proliferation and migration of GSCs,immunotherapy,and non-coding microRNAs may provide better means of treating GBM.Identification and characterization of GSC-specific signaling pathways would be necessary to identify specific therapeutic targets which may lead to the development of more efficient therapies selectively targeting GSCs.Several signaling pathways including mTOR,AKT,maternal embryonic leucine zipper kinase(MELK),NOTCH1 and Wnt/β-catenin as well as expression of cancer stem cell markers CD133,CD44,Oct4,Sox2,Nanog,and ALDHlA1 maintain GSC properties.Moreover,the data published in the Cancer Genome Atlas(TCGA)specifically demonstrated the activated PI3K/AKT/mTOR pathway in GBM tumorigenesis.Studying such pathways may help to understand GSC biology and lead to the development of potential therapeutic interventions to render them more sensitive to chemotherapy and radiation therapy.

正常对照组、吗啡组(2,5,10,20μM); 2正常对照组、吗啡组(6h,12h,24h);3.正常对照组、吗啡组(10μM)、纳洛酮组(10μM)、吗啡+纳洛酮组(纳洛酮提前吗啡1h加入使之预先与阿片类受体结合)。置细胞培养箱孵育。

还有 2.细胞存活率的检测 使用MTT法检测细胞存活率。将细胞以1×104/孔的密度铺在96孔培养板内,使用不同浓度吗啡处理,然后将20μ1 MTT加入每个孔中,将培养板置于37℃孵育4小时。然后用ELISA读数仪在570nm波长下检测比色度。3.细胞凋亡的检测 体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞系以1×105/孔种植于铺有载玻片的12孔板中,置于细胞培养箱孵育,用吗啡及纳洛酮处理后,取出载玻片,将其用丙酮/甲醇(1：1)室温固定5分钟,然后按照TUNEL试剂盒指示进行操作检测细胞凋亡。 4. Western Blotting 使用Western Blot方法检测BV-2小胶质细胞经吗啡处理后cleaved caspase-3,caspase-3等蛋白水平的变化,用GAPDH作为实验内参。收集各组实验细胞后,使用RIPA Lysis Buffer裂解离心后用12%SDS-PAGE将样品蛋白电泳分离,然后转膜至硝酸纤维膜。将膜用5%脱脂奶粉室温封闭2小时,然后用一抗4℃孵育过夜后,再用二抗室温孵育1小时。最后暗室曝光并扫描记录结果。 5.细胞免疫荧光染色 使用细胞免疫荧光检测体外培养原代小胶质细胞经吗啡处理后cleaved caspase-3蛋白水平变化,用RCA-1作为小胶质细胞标志物。以1×105/孔种植于铺有载玻片的12孔板中,用吗啡及纳洛酮处理后,取出载玻片,将其用丙酮／甲醇(1：1)室温固定5分钟,将固定后的小胶质细胞用一抗室温孵育过夜,然后用二抗避光室温孵育2小时。最后用荧光倒置显微镜和Leica TCS SP2 Laser Scanning共聚焦显微镜观察实验结果。 6. RT-PCR 使用RT-PCR检测小胶质细胞经吗啡处理后CD11b、TNF-α、IL-1β和IL-6mRNA水平变化,用beta-Actin作为实验内参。收集各组实验细胞后,抽提RNA。以mRNA为模板,在逆转录酶的作用下逆转录合成cDNA。以cDNA为模板,用小鼠CD11b、TNFα、IL-1β和IL-6相应引物特异性扩增相应的基因。用琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行半定量检测。 结果 1.吗啡通过阿片受体途径激活小胶质细胞

吗啡(2,5,10,20μM)处理后小胶质细胞激活标志物CD11b mRNA水平呈剂量和时间依赖性升高,较未处理组有显著差异。阿片类受体阻断剂纳洛酮可以阻断吗啡的作用。 2.吗啡通过阿片受体途径诱导小胶质细胞凋亡MTT结果显示吗啡(2,5,10,20μM)处理后小胶质细胞存活率呈剂量依赖性明显下降。TUNEL染色显示吗啡处理(10μM)使小胶质细胞凋亡明显增加,较未处理组有显著差异。Western Blot结果显示吗啡(10μM)处理使BV-2小胶质细胞中caspase-3活化明显升高,而体外培养原代小胶质细胞cleaved caspase-3和小胶质细胞标志物RCA-1双抗体免疫荧光染色也得到一致的结果。并且纳洛酮可阻断吗啡引起的小胶质细胞凋亡及caspase-3激活。 3.吗啡通过阿片受体途径诱导小胶质细胞细胞因子表达RT-PCR的方法检测了小胶质细胞经吗啡(10μM)处理后TNFαIL-1β和IL-6 mRNA的表达,发现小胶质细胞中上述三种细胞因子表达明显增加,较未处理组有显著差异。纳洛酮可阻断吗啡的作用。 结论 1.吗啡通过阿片受体途径激活并诱导小胶质细胞细胞因子的表达。 2.吗啡通过阿片受体途径诱导小胶质细胞凋亡,caspase-3途径介导了吗啡诱导的小胶质细胞凋亡。 Selinexor 价格 第二部分GSK3β信号通路在吗啡诱导小胶质细胞凋亡中的作用研究 目的 使用体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞系探讨GSK3β信号通路在吗啡诱导小胶质细胞凋亡中的作用及其具体机制。 方法 1.体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞系并进行吗啡处理 体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞分别分组如下：1.正常对照组、吗啡组(2,5,10,20 u M)；2.正常对照组、吗啡组(6h,12h,24h) 3.正常对照组、吗啡组(10μM)、纳洛酮组(10μM)、吗啡+纳洛酮组(纳洛酮提前吗啡1h加入使之预先与阿片类受体结合)；4.正常对照组、吗啡组、SB216763组(10μM)、吗啡+SB216763组(SB216763提前1h加入)。置细胞培养箱孵育。 或者 2. Western Blotting 使用Western Blot方法检测小胶质细胞phosphor-Akt、phosphor-GSK3β、cleaved

caspase-3、cleaved caspase-8、phosphor-p38、Bax、Bcl-2等蛋白水平变化。 3.细胞凋亡的检测 使用TUNEL染色法检测小胶质细胞凋亡。 4. RT-PCR 使用RT-PCR检测小胶质细胞Bax和Bcl-2 mRNA水平变化。 结果 1.吗啡通过阿片受体途径使小胶质细胞phosphor-Akt和phosphor-GSK3β蛋白水平降低 Western Blot结果显示,吗啡使小胶质细胞phosphor-Akt和phosphor-GSK3p蛋白水平明显降低,且表现为时间和剂量依赖性,纳洛酮可阻断吗啡的作用。 2.抑制GSK3β增加吗啡诱导的小胶质细胞凋亡 TUNEL方法检测细胞凋亡,发现特异性GSK3β抑制剂SB216763预处理显著增加了吗啡诱导的小胶质细胞凋亡。Western Blot方法检测小胶质细胞cleaved caspase-3和cleaved caspase-8蛋白水平,发现SB216763预处理可以明显增加吗啡引起的caspase-3和caspase-8活化。 3.抑制GSK3β使吗啡处理引起的Bax/Bcl-2和phosphor-p38变化增加 Western Blot方法检测小胶质细胞Bax和Bcl-2蛋白水平变化,发现吗啡处理使小胶质细胞Bax水平升高,Bcl-2水平降低。而SB216763预处理增加了吗啡引起的Bax/Bcl-2变化。RT-PCR方法检测小胶质细胞中Bax和Bcl-2 mRNA表达变化,发现吗啡处理使小胶质细胞Bax mRNA水平升高,Bcl-2 mRNA水平降低,而SB216763预处理增加了吗啡引起的Bax/Bcl-2 mRNA变化,与蛋白变化一致。Western Blot方法检测小胶质细胞phosphor-p38水平,发现吗啡处理使小胶质细胞phosphor-p38水平升高,纳洛酮可阻断吗啡的作用。而SB216763预处理可显著增加吗啡引起的phosphor-p38升高。 结论 1.吗啡通过阿片受体途径使小胶质细胞phosphor-Akt和phosphor-GSK3β蛋白水平降低。 2.抑制GSK3β增加吗啡诱导的小胶质细胞凋亡。 3.抑制GSK3β增加吗啡引起的Bax/Bcl-2水平变化。 4.

05). What’s more, the apoptotic peak appeared in miRNA-122 a group. Its invasion ability decreased most obviously(40.25 ± 3.97/visual 没有 field), the number of clone ability was 104.93 ± 4.87 and the inhibitory effect was the most obviously. There was statistically significant difference as compared with other groups(P < 0.05). Conclusions: A549 cells transfected by

ultrasound microbubble-mediated antisense miRNA-224 and mi RNA-122 a plasmids possessed good transfection efficiency. The cell growth, invasion and colony forming abilities of transfected A549 cells were suppressed, which laid a solid foundation for the gene therapy of non-small cell lung cancer.
目的探讨LRRC3B在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达情况及其与临床病理参数的关系。方法选取2008~2011年于本院就诊的101例NSCLC患者的组织标本及20例癌旁正常组织标本纳入本研究。采用免疫组织化学法检测入选标本中LRRC3B的表达情况,分析其与NSCLC患者各临床病理参数的关系。结果 LRRC3B阳性信号定位于细胞质。LRRC3B在正常支气管上皮细胞及肺泡细胞中均为阳性表达。在肺癌组织中,LRRC3B高表达62例(61.4%),低表达39例(38.6%),且LRRC3B的表达特点在不同TNM分期以及不同淋巴结转移情况的组织间存在显著差异(P
目的探讨肺小结节的多层螺旋CT诊断价值。方法选择在我院进行诊治的肺小结节患者189例,其中恶性结节49例,良性结节140例,均进行常规多层螺旋CT检查与CT灌注参数分析。结果所有患者均完成CT扫描,恶性结节组的钙化、毛刺征、空泡征、棘状突起、分叶征等比例明显高于良性结节组(P<0.05)。恶性结节组的PP值明显低于良性结节组,而BP值明显高于良性结节组(P<0.05)。结论肺小结节的多层螺旋CT诊断具有较高的价值,能提高对肺小结节的定性诊断水平,值得推广应用。
目的:探讨螺旋断层调强根治性放射治疗(HT)同步化疗治疗Ⅳ期非小细胞肺癌的疗效及安全性。方法:对40例Ⅳ期非小细胞肺癌患者的资料进行回顾性分析,所有患者均接受HT同步化疗的治疗方法。结果:近期疗效中,2例(占5%)完全缓解,26例(占65%)部分缓解,治疗总有效率为70.0%。1年和2年局部控制率分别为67.5%和42.5%,无进展生存率分别为32.5%和7.5%,总生存率分别为50.0%和7.5%。所有患者中位无进展生存期为8个月,中位生存期为12个月。两组患者在年龄、性别、有无吸烟史、转移器官数目以及病理类型对生存预后的影响无差异。大部分患者不良反应仅为1~2级,少数患者出现3级不良反应,未出现4级不良反应。结论:螺旋断层调强根治性放射治疗同步化疗治疗Ⅳ期非小细胞肺癌可改善患者生存质量,治疗中不良反应可耐受。
氯喹作为传统的老药,不仅用于抗疟疾治疗,还用于类风湿关节炎、红斑狼疮等疾病的治疗。近年发现氯喹还具有抗肿瘤作用,并在克服肿瘤耐药方面发挥重要作用。氯喹不仅通过抑制肿瘤的自噬增加放化疗的敏感性,还可抑制腺苷三磷酸结合体家族蛋白,减少抗肿瘤药物的排出;另外,氯喹还可通过影响DNA分子的稳定性、促进肿瘤血管正常化,同时提高蛋白酶体抑制剂效应、促进肿瘤免疫,进而达到抗肿瘤的作用。
目的探讨吉西他滨联合替吉奥方案二线治疗老年肺鳞癌ⅢB期患者的疗效。方法将本院2009年11月至2014年9月符合条件的肺鳞癌患者共105例随机分为吉西他滨联合替吉奥(GS)组及吉西他滨单药(GEM)组。2个周期后按照RECIST

Smoothened抑制剂 1.1版标准评价近期疗效,采用国立癌症研究所毒性判定标准(NCI CTC)4.0评价化疗毒性反应,同时随访其生存情况并采用Cox风险比例回归模型分析影响预后的因素。结果全组105例患者均可评价疗效和毒副反应,其中GS组的有效率和疾病控制率分别为39.62%(21/53)和49.06%(26/53),均高于GEM组的19.23%(10/52)和26.92%(14/52),差异有统计学意义(P<0.05);GS组的中位无进展生存期和总生存期分别为4.3个月和9.2个月,优于GEM组的3.8个月和8.0个月,差异均有统计学意义(P<0.05);与GEM组相比,GS组的白细胞降低、恶心呕吐、腹泻、便秘、腹痛、口腔溃疡、皮疹及疲乏的发生率较高,差异均有统计学意义(P<0.05);多因素分析后TNM分期及进展时间是影响总生存期的独立因素。结论对老年、肺鳞癌患者的二线治疗,采用GS方案较单药GEM方案在提高近期疗效及预后上有优势,但不良反应较重,可以有选择地用于身体状况较好的患者。
目的 获悉更多 :检测中国人非小细胞肺癌表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因和棘皮动物微管相关蛋白样-4与渐变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因的突变情况,同时分析这两种基因与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)临床病理特征的关系。方法 :采用PCR扩增和基因测序法检测252例NSCLCs EGFR基因外显子19和21的突变情况,real-time PCR法检测EML4-ALK融合基因的突变情况,分析突变与临床特征的关系。结果:252例非小细胞肺癌组织标本EGFR的突变率为38.8%(98例),其中19外显子突变率为15.8%(40例),21外显子突变率为23.0%(58例)。EGFR突变的患者多为女性、无吸烟史和腺癌(P0.05)。252例非小细胞肺癌组织标本中,EML4-ALK融合基因突变率4.7%(12例)。EML4-ALK基因突变患者多为女性和年龄较小者(P0.

4Tris-HCL低渗去除污染的间质细胞。用台盼蓝染色检测细胞的存活力。利用免疫荧光检测睾丸支持细胞特异性分泌的雄激素结合蛋白（androgen binding protein，ABP）及结晶紫染色观察细胞形态进行细胞鉴定。 研究结果： 通过台盼蓝染色检测细胞活力和活细胞形态学彩图，显示两步酶法获取的睾丸支持细胞的活力达95%以上。经免疫荧光染色及结晶紫染色观察细胞的形态，获取的睾丸支持细胞48h之后纯度达到95%以上。

研究结论： 1、两步酶法分离培养原代睾丸支持细胞步骤更加简单，污染的其他生殖细胞数量更少。 2、通过镜下观察、结晶紫染色及免疫荧光鉴定，证实两步酶法获取的原代睾丸支持细胞纯度以及细胞活力均达95%以上。 selleck screening library 第二部分淫羊藿苷对大鼠睾丸支持细胞体外增殖的影响 研究目的： 用MTT法、流式细胞术、直接细胞计数方法检测淫羊藿苷对睾丸支持细胞体外增殖的影响。 研究方法： 采用MTT法检测ICA对睾丸支持细胞体外增殖的作用，并确定ICA的有效剂量和作用时间。分别用0μM,5μM,10μM,15μM,20μM及25μM不同浓度ICA对SCs处理24h，以及根据已确定有效剂量10μM作用于SCs0h,6h,12h,24h及48h不同时间点，采用MTT法，在酶标仪下检测每孔光密度值来观察经药物作用后睾丸支持细胞的活力；为了避免MTT法的不足，我们采用血小板直接计数不同剂量ICA处理24h后以及10μM处理的不同时间点的48孔板中SCs的数量，此方法比MTT更加精确，误差更小，但较MTT繁琐；为了避免MTT以及直接细胞计数的误差，多种检测方法互相印证，我们又采用荧光标记物CFSE标记培养于六孔板中的SCs，SCs的处理条件同MTT及细胞计数，然后用流式细胞仪检测每组细胞的荧光强度，随着细胞增殖，整合至细胞中的CFSE平均分配于子代细胞中，荧光强度也逐渐减弱，利用这一特点可观察细胞的增殖能力。

研究结果： 通过MTT、直接细胞计数以及荧光强度的检测，观察ICA对SCs的增殖的影响，我们发现与空白对照组比较，ICA5μM组细胞光密度值、细胞数量及荧光强度无明显变化（p﹥0.05），ICA10μM,15μM，20μM及25μM各组细胞生长光密度值及细胞数量明显增高，荧光强度显著减弱（p﹤0.05）。ICA10μM处理的SCs随着时间的延长增殖明显增加，24h及48h时间点SCs光密度值及细胞数量明显增高，荧光强度明显减弱（p﹤0.05）。研究结论： selleck产品 以上各种方法证明，ICA能够显著促进SCs的体外增殖，并且呈现时间及剂量依赖性。 第三部分：淫羊藿苷促进大鼠睾丸支持细胞体外增殖的机制研究 研究目的： 探讨淫羊藿苷促进睾丸支持细胞体外增殖作用的机制。 研究方法： MAPKs，丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPKs）是存在于大多数细胞内的一类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶。其主要作用是将细胞外刺激信号转导至细胞及其核内，并引起细胞相应的生物学反应，如细胞增殖、分化、转化及凋亡等。截至目前，在哺乳类细胞已发现存在着下述三条并行的MAPKs信号通路，即ERK、JNK及p38信号通路，研究证实，ERK信号通路主要参与细胞增殖与分化的调控，而JNK及p38主要参与氧化应激、炎症与细胞凋亡等的调控。因此在实验中，我们分别将细胞分为空白对照组、ICA组（只加药）、UO126组、UO126+ICA、SP600125组、SP600125+ICA、SB203580组及SB203580+ICA组，用以上三种信号通路的特异性阻断剂，即ERK阻断剂UO126、JNK阻断剂SP600125、p38的阻断剂SB203580分别预处理SCs之后加入10μM浓度的ICA作用24h后，用MTT检测各组细胞的光密度值、细胞计数及流式细胞仪检测各组荧光强度。根据上述实验结果，选择对细胞增殖有影响的阻断剂作用于细胞，处理SCs24h后，提取各组细胞蛋白，用Western blot检测各组细胞中磷酸化ERK1/2及总ERK1/2的表达水平。 研究结果： MTT检测各组光密度值显示，与空白对照组相比，ICA组（只加药）光密度值明显增加(p﹤0.05)，UO126与UO126+ICA组光密度值显著低于空白对照组(p﹤0.05)，其余各组与空白对照组之间以及各组之间无明显差异（p﹥0.05）；直接细胞计数显示ICA组（只加药）细胞数量明显高于其他各组(p﹤0.05)，UO126与UO126+ICA组细胞数量显著低于其余各组，SP600125组、SP600125+ICA、SB203580组及SB203580+ICA组与空白对照组之间无明显差异（p﹥0.05）；流式细胞仪检测各组荧光强度显示结果与MTT及细胞计数结果一致；因此，根据上述实验结果我们用Western

NVP-BEZ235分子重量 blot方法检测p-ERK1/2及ERK1/2的表达水平显示，p-ERK1/2的表达随着ICA的剂量增加及时间的延长而增强，加入ERK1/2信号通路的阻断剂UO126之后，与空白对照组及ICA组相比较，只有UO126与UO126+ICA组p-ERK1/2的表达受到显著抑制(p﹤0.05)，ICA组p-ERK1/2显著高于其余各组(p﹤0.05)。 研究结论： 1、ERK阻断剂UO126能够明显阻断ICA对SCs促进增殖的作用，而JNK及p38阻断剂不能抑制ICA对SCs促进增殖的作用。 2、ICA能够显著提高SCs中p-ERK1/2水平的表达，并于ICA的剂量和作用时间呈正相关，提示ERK1/2信号通路是ICA促进SCs体外增殖的可能信号通路。
白术是最常用的中药，为菊科植物白术的根茎，具有利尿、抗炎、抗肿瘤、抗衰老、止痛、调节免疫、降血糖以及抑制代谢活化酶等作用，为药食同源之品。白术的主要活性成分包括白术多糖和白术内酯等。目前研究已发现白术多糖和白术内酯具有多种药理活性。其中，白术多糖具有调节免疫、抗氧化及抗衰老、抗肿瘤、降血糖等作用，而白术内酯药理作用主要涉及对炎症、胃肠运动、离体子宫、肿瘤的影响等。但目前对白术多糖和白术内酯的研究还比较粗浅，因此从细胞和分子水平阐明白术多糖增强免疫作用和调节免疫的机理以及阐明白术内酯类成分抗炎作用机理，对于进一步进行植物功能性因子研究及保健食品开发和医学用药，具有非常重要的意义。 （1）从药食同源之品白术根茎中提取水溶性白术粗多糖，粗多糖经冻融、醇沉分级，蛋白酶法和Sevag法联合脱蛋白得到白术多糖。 （2）本论文研究了白术多糖对巨噬细胞的免疫调节作用及其在细胞和分子水平上的免疫机制。利用流式细胞技术检测白术多糖诱导RAW264.7细胞的吞噬功能情况；利用ELISA方法测定白术多糖诱导RAW264.

01)；14d达高峰(P＜0.01)；以后维持在较高水平，至35d仍明显高于A组(P＜0.01)。C组：TGF-β_1 mRNA的表达从1d至35d均较B组减弱(P＜0.05)；但所有时间点仍高于A组(P＜0.05)。 6．治疗前后染毒大鼠肺组织NF-κB活性的动态变化：A组大鼠肺组织NF-κB活性很低。B组大鼠肺组织NF-κB活性1d开始较A组显著升高(P＜0.01)；3d时达高峰(P＜0.01)；7d及14d时仍高于A组(P＜0.01)。C组NF-κB活性较B组明显减弱(P＜0.01)；在1d时最高，以后逐渐下降，在14d时与A组相比无统计学意义(P＞0.05)。 RGFP966小白鼠 7．染毒大鼠肺组织磷酸化p38MAPK蛋白的变化：A组大鼠肺组织磷酸化p38MAPK蛋白表达较少。B组大鼠肺组织磷酸化p38MAPK蛋白1d开始较A组显著升高(P＜0.01)；3d时达高峰(P＜0.01)；以后逐渐下降，21d及以后与A组相比无统计学意义(P＞0.05)。C组磷酸化p38MAPK蛋白表达1d至14d时较B组明显减弱(P＜0.01)；仅1d至7d时高于对照组(P＜0.05)；在14d时与A组相比无统计学意义(P＞0.05)。

结论：应用MT治疗，可明显降低百草枯中毒大鼠血清MDA含量，增加SOD及GSH-Px活力；减轻染毒大鼠肺组织早期的炎性改变及后期的肺纤维化趋势，这可能与MT较强的抗氧化功能以及降低肺组织NF-κB活性，减少TGF-β_1、磷酸化p38MAPK的表达，调节MMPs和TIMPs之间的平衡有密切关系。
第一部分高糖对培养的人脐静脉内皮细胞p38 MAPK信号系统表达的影响 目的:检测高糖对人脐静脉血管内皮细胞系p38MAPK信号系统表达的影响,从而探讨p38MAPK信号系统在高糖诱导糖尿病视网膜血管病变中的作用。 方法:以人脐静脉血管内皮细胞﹙HUVEC﹚为研究对象,模拟糖尿病状态,以高浓度葡萄糖刺激HUVEC,采用RT-PCR、Western-blot法检测细胞中p38MAPK、转化生长因子β2和基质金属蛋白酶活力和蛋白表达情况的变化,电镜观察超微结构及流式细胞仪检测细胞周期的变化。 结果:高浓度葡萄糖可使内皮细胞中p38MAPK、MMP-2和TGFβ2表达增加,超微结构及细胞周期发生变化。 结论:高糖诱导糖尿病视网膜血管病变可能部分通过p38MAPK信号系统表达增强。 第二部分p38 MAPK信号系统在实验性糖尿病仓鼠视网膜中的表达变化 目的:检测p38 MAPK信号系统在实验性糖尿病仓鼠视网膜中表达的变化,从而探讨p38 MAPK信号系统在糖尿病视网膜病变(diabetic

retinopathy DR)发生发展中的作用及其机制。 方法:用链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)诱导仓鼠糖尿病模型,HE染色观察光镜下视网膜的形态特征及变化,用免疫组织化学法检测正常对照组(非糖尿病动物组)和糖尿病动物模型组视网膜中TGF-β2的表达,电镜观察其超微结构的变化。血清学检测仓鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和电化学发光法检测胰岛素水平等变化。提取视网膜中总RNA,半定量RT-PCR观察视网膜中p38 MAPK、MMP-2和TGFβ2 mRNA表达情况,Western-blot检测糖尿病仓鼠视网膜中p38 MAPK、MMP-2和TGFβ2蛋白情况。 结果:糖尿病仓鼠不仅表现为高血糖,还表现为高TG血症。糖尿病仓鼠视网膜内TGF-β2表达呈阳性染色反应,视网膜超微结构出现膜盘结构分层,数量稀少;节细胞层内质网扩张,核周间隙扩大,细胞内线粒体肿胀等变化。糖尿病仓鼠视网膜中p38 购买ZD6474 MAPK、MMP-2和TGFβ2 mRNA表达呈升高趋势、蛋白表达增多,与正常对照组相比于造模后16周末时即差异具有统计学意义(P < 0.05)。 结论:此为研究p38 MAPK信号途径参与DR的发病机制提供了实验依据。
淋巴细胞作为免疫调节的中心环节,在炎症性肠病的发生和持久化中起重要作用。本课题采用半抗原诱发大鼠结肠炎模型,用蛋白质组学方法研究了淋巴细胞的蛋白表达差异谱。进一步研究了p38

MAPK信号通路在淋巴细胞免疫应答和细胞因子分泌中的作用。同时采用流式细胞术、RT-PCR及ELISA方法对中药肠泰有效部位治疗结肠炎的作用机制进行了研究。结果显示与细胞周期、增殖、信号转导、炎症、凋亡和代谢相关的蛋白分子参与了TNBS诱导的结肠炎中淋巴细胞的免疫应答过程。尤其是一系列与凋亡相关蛋白在结肠炎发病中起重要作用。P38 MAPK通路参与了TNBS诱发的结肠炎中肠系膜淋巴结T淋巴细胞免疫应答,该通路对IL-2、IFN-γ等细胞因子的表达进行了调控。中药复方肠泰有效部位可调节T淋巴细胞亚群比例、降低炎性介质和促炎细胞因子的分泌而发挥对结肠炎的抗炎和免疫调控作用,进而抑制炎症的发生。
近年来的研究证明,在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)的发病初期,病原体及代谢产物(如内、外毒素),尤其是炎症反应早期出现的细胞因子,可激活外源性凝血途径,导致弥漫性血管内凝血(DIC)。同时,疾病早期产生的大量凝血酶可促进血小板和中性粒细胞的聚集、黏附,加强内皮细胞和中性粒细胞之间的相互作用,加重炎症反应。在ALI/ARDS病程中原有的凝血与抗凝、纤溶与抗纤溶、炎症与抗炎之间的平衡被打破,凝血级联与炎症级联之间相互促进,形成一种自动放大的效应,使病情加重,为此干预凝血系统的异常对控制ALI/ARDS的病情发展具有重要意义。另外,ALI/ARDS时炎症反应的失控与p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路及核因子-κB 获悉更多 (NF-κB)的激活密切相关。已有研究证实了肝素除具备抗凝作用外,还有一定的抗炎、抗过敏作用,有关肝素对p38MAPK信号转导通路以及NF-κB活性影响的研究,国内外未见有相关报道。 目的:本实验拟应用目前常用的抗凝药肝素(包括低分子肝素)来治疗ALI/ARDS,同时,通过研究肝素对p38 MAPK信号转导通路及NF-κB活性的影响,进一步明确肝素对ALI/ARDS抗炎作用的分子机制。 方法:本实验采用新西兰大耳白兔48只,动物随机分为4组:对照组(A组)、内毒素组(B组)、内毒素+肝素组(C组)和内毒素+低分子肝素组(D组),每组12只。1.用大肠杆菌内毒素(LPS)制备大耳白兔急性肺损伤模型;2.用Nova Stst Profile M血气分析仪进行血气分析;3.用双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度;4. ELISA法测定血清血管内皮粘附分子-1(sICAM-1)的浓度;5.Western blots检测多形核中性白细胞(PMN)中磷酸化p38 MAPK的含量;6.电泳迁移率变动分析实验(EMSA)测定肺组织中NF-κB活性;7.计算肺干重和湿重比值(肺D/W)及观察肺组织病理学改变。观察肝素对ALI/ARDS的疗效,并通过研究肝素对TNF-α、sICAM-1表达、p38 MAPK基因信号转导通路、NF-κB活性的影响来进一步探讨其抗炎作用的分子机制。 结果: 1.

44%，1μM迁移率为50.02%，3μM为25.97%，5μM为12.99%；明胶酶谱实验中观察到与对照组相比，经过ADS-I作用后，3、5μM的ADS-I处理24小时后U87细胞所分泌的MMP-2明显降低，分别下降至73.22%和61.53%，而1μM ADS-I处理24小时后对U87分泌的MMP-2活性的抑制作用不明显。在细胞免疫化学中，显示经过DAB显色实验及显色程度对比，得出对照组与低剂量组染色呈深棕黄色（+++），3、5μM的ADS-I处理24小时后的细胞分别呈棕黄色（++）和浅棕黄色（+），且IOD值随着药物浓度的增大而值越低，表明此蛋白的阳性率也随之降低，可以说明ADS-I作用于人脑胶质瘤U87细胞内MMP-2活性明显降低，随着药物浓度的增加，抑制U87细胞内MMP-2的作用越强。结论：一定浓度的ADS-I可体外抑制人脑胶质瘤U87细胞迁移和侵袭能力，其机制可能与ADS-I降低细胞基底金属酶的活性相关。
目的：建立关节炎大鼠成纤维细胞和单核细胞共培养模型并诱生破骨样细胞,在此基础上,根据前期临床与实验工作基础,对清络通痹颗粒(QLT)抑制破骨细胞分化成熟的分子机制进行深入探讨。

方法：佐剂性关节炎大鼠造模,提取分离滑膜成纤维细胞和单核细胞,并使用悬挂式小室及六孔板作为共培养材料,将以上两种细胞进行共培养,成纤维细胞置于上层小室内,单核细胞置于下层六孔板内,进行物质交换以此模拟类风湿关节炎病理过程,成功诱生出破骨样细胞,经鉴定为抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色阳性的多核细胞,证实本实验共培养体系可成功诱导出破骨样细胞,其具有骨吸收功能；制备QLT含药血清,共设六组,每组设3个复孔(重复3次以上),分别于共培养第3-5d和第18-21d加入共培养体系,48h后Western blot法观察其对各组破骨细胞TRAF6、ERK1/2、p38、JNK通路表达的影响,免疫荧光法观察其对各组NFATcl表达的影响；为进一步观察QLT对破骨细胞内其他信号通路是否也发挥调控作用,在加入QLT中剂量含药血清基础上,加入MAPK通路抑制剂,免疫荧光法观察各组之间NFATcl表达的差异。 Duvelisib 结果：QLT14.4,7.2,3.6g. kg-1给药的大鼠含药血清可不同程度降低分化前及分化后阶段破骨细胞TRAF6、MAPK通路和NFATcl表达,以高剂量抑制作用显著(P0.05)。

INCB018424 结论：QLT含药血清对TRAF6、ERK1/2、p38、JNK信号通路、NFATcl表达均有抑制作用,并可能对影响破骨细胞分化成熟的其他信号通路也发挥调控作用。
目的： 阿尔茨海默病(Alzheimer’disease, AD),是一种多因素引起的进行性致死性神经系统退行性疾病,临床表现为认知和记忆能力不断恶化,日常生活能力进行性减退,并有各种神经精神症状和行为障碍。老年斑(SPs)和神经元纤维缠结(NFTs)被认为是AD关键的病理特征。目前多数学者认为p-淀粉样蛋白(p-amyloid, Aβ)沉积成为AD发病过程中的重要因素,具有关键作用,是各种原因诱发AD的共同通路。Ap具有神经毒性,当前应用Aβ25-35片段诱导PC12细胞损伤建立AD细胞模型已被广泛用于体外研究实验。淫羊藿苷(icaritin, ICA)为小檗科淫羊属植物淫羊藿的主要活性成分,具多重药理学作用,近年来淫羊藿苷在中枢神经系统的药理作用及其机制研究日益增多,具有抗痴呆抗衰老、抗抑郁、改善缺血性脑损伤等作用。cAMP反应序列结合蛋白(CREB)是一种重要的核转录因子,调节启动子中具有环磷酸腺苷反应单元(CRE)的基因转录,在神经元再生、突触形成及学习记忆等方面具有重要的调节作用。脑源性神经生长因子(Brain-derived neurotrophic factor, BDNF)是神经营养因子(NT)家族的重要成员,对外周和中枢神经具有保护作用,不但能促进神经元生存、生长、分化,而且在调节突触传递和突触可塑性方面发挥重要作用。体外实验发现,给予神经元亚毒性剂量的Ap1-42, CREB信号转导通路受阻,BDNF含量下降,进一步导致突触功能障碍和神经元变性。本研究以Aβ25-35诱导损伤PC12细胞为AD细胞模型,探讨ICA对其CREB及BDNF表达的影响。

方法： 1、细胞培养：PC12细胞培养于含10%胎牛血清和含100U/ml青霉素及100U/ml链霉素的高糖DMEM培养基中,置于37℃、含5%C02的培养箱中培养,2天换液一次,药物干预及各项指标检测均取对数生长期的细胞。 2、MTT比色法：实验分control组、Ap组、ICA组、LY组、LY+ICA组。除control组外,余下四组Ap的浓度均为20μmol/L;ICA组：先加ICA孵育1小时后再加Ap,ICA浓度为20μmol/L;LY组的LY294002浓度为50μmol/L；LY+ICA组为先加LY294002浓度为50μmol/L孵育1h,再加ICA和Ap使其浓度为20pmol/L。 3.Western blot检测：实验分组同(2),测定各组p-CREB (Ser133)/CREB、BDNF、p-Akt(Ser473)/Akt的蛋白表达。 结果： 1、与control组比较,Aβ25-35处理使PC12细胞存活率明显降低,差异有显著性(P<0.01)；与Ap组比较,ICA预处理能提高PC12细胞存活率,差异有显著性(P<0.01)；与ICA组比较,ICA+LY组PC12细胞存活率下降,差异有统计学意义(P<0.05)；与Ap组相比,ICA组能够明显增加模型细胞中P-CREB、BDNF、P、Akt蛋白的表达,差异有统计学意义(P
目的：本实验通过研究加味通腑汤对溃疡性结肠炎大鼠模型的结肠组织上皮细胞凋亡及调控基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响，以观察和探讨加味通腑汤对溃疡性结肠炎的治疗效果，并希望能够为中医药治疗溃疡性结肠炎提供一份充分的实验依据。 OTX015分子量 材料与方法：将清洁级SD大鼠70只，用完全随机分组的方法分为空白对照组、模型组、补脾益肠丸组、柳氮磺吡啶组、加味通腑汤低剂量组（3.25g/kg）、加味通腑汤中剂量组（6.5g/kg）、加味通腑汤高剂量组（13g/kg）。用5%的TNBS原液与无水乙醇按1:1的体积比配备成20mg/kg的配比液以建立溃疡性结肠炎大鼠模型。从造模第4天开始，正常组和模型组用生理盐水灌胃，其他组分别给予补脾益肠丸，柳氮磺吡啶，加味通腑汤高剂量、加味通腑汤中剂量、加味通腑汤低剂量处理，均连续灌胃21天后处死。运用TUNEL染色法检测溃疡性结肠炎大鼠模型结肠上皮细胞凋亡和用SABC法检测凋亡调控基因Bcl-2、 Bax蛋白的表达。 结果：通过统计学分析，模型组与空白对照组比较，AI值明显升高，Bcl-2蛋白表达明显升高，Bax蛋白表达明显升高，差异有显著意义(P<0.

05)；MDC染色显示随rhG-CSF给药浓度增加,巨自噬空泡数量逐渐上调,呈剂量依赖性,显示随给药浓度增加,自噬活性也相应增强,差异具有统计学意义(p<0.05)；rhG-CSF组大鼠神经功能学评分较模型组有降低,差异有统计学意义(p<0.05)；治疗后较治疗前比较,大鼠的神经功能学评分有降低,差异有统计学意义(p
当今世界，核能在工业、国防、科技、医疗等领域的普及应用，它在造福人类的同时，也不可避免的给世界带来严重的核辐射危险，不仅对环境造成污染，更重要的是给人类的健康安全带来了严峻的挑战。我国核能技术飞速发展，不仅拥有核武器、核潜艇等国防力量，而且拥有大量的核电站。2011年日本福岛核电站因里氏9.0级地震而泄露在对日本造成巨大危害的同时也给我国带来了核恐慌。现代生物学技术不断前进，放射治疗是目前临床恶性肿瘤治疗的常用方法之一。但越来越多临床证据表明：电离辐射在杀伤肿瘤细胞的同时，不可避免的会造成对正常组织的损伤。尽管现代放疗技术和方法都有很大发展，这一副作用仍严重影响放疗在临床上的应用。

没有 放射性肺纤维化是胸部肿瘤患者放射治疗中常见的并发症，也是核与辐射突发事件中受大剂量照射伤员常见的病理损伤，是导致肿瘤病人放疗失败和急性放射病伤员病程后期的主要死因之一。国内外对放射性肺纤维化虽然进行了多年的研究，但辐射导致肺纤维化发生的机制尚不十分清楚，由于机制不清至今在临床上还未找到防治放射性肺纤维化良好的医学处置方法。因此，针对放射性肺纤维化发生过程中的某个关键环节作为靶点，以探讨电离辐射(ionizing radiation, IR)与肺纤维化的关系及其机制，为防治肺纤维化的研究提供新的思路和方案。 Cobimetinib临床实验 肺纤维化以肺泡上皮细胞受损以及成纤维细胞/肌成纤维细胞聚集为特征，并有胶原及其他细胞外基质沉积，最终影响正常肺组织修复过程及细胞外基质异常沉积而导致纤维化发生。由于肌成纤维细胞在这一病理过程中起重要作用，所以它的起源是肺纤维化研究的热点和关键点。研究表明，在损伤因素刺激下，上皮细胞可逐渐失去上皮特性并获得成纤维细胞等间质细胞特性，即发生上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）。在特发性肺纤维化的动物模型以及病人标本中，都发现EMT的存在。在某些因子参与和诱导下，与EMT相关性及特异性转录因子被活化，特异性细胞膜蛋白表达增强，细胞骨架蛋白发生重构，细胞外基质降解酶发生改变以及特异性微小RNA的变化等等细胞内分子水平的变化都可引发并维持EMT。电离辐射是诱导EMT的重要因素之一。已有研究显示microRNA-200c可以抑制EMT，而TBK1是miR-200c直接靶点。因此，探讨TBK1与IR,

EMT发生的相关性，以及TBK1作用的机制，将为明确放射性肺纤维化发生提供重要的实验依据。 本研究选取肺泡上皮细胞作为实验对象，通过EMT标志物等指标研究IR对EMT的影响，并围绕TBK1表达水平的变化，对TBK1进行干扰，进一步明确TBK1及其下游信号通路在IR诱导EMT中的作用。 研究内容： 1、辐射对肺泡上皮细胞上皮间质转化的影响：采用人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)和大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN)为研究对象，给予不同照射剂量，选取不同照射时间，观察在此条件下EMT标志物变化情况，建立辐射诱导EMT细胞模型； 2、干扰TBK1对辐射诱导肺泡上皮细胞上皮间质转化的影响：①脂质体转染siTBK1，明确干扰效果；②干扰TBK1后选择适当剂量及时间照射，观察EMT变化； 3、TBK1对辐射诱导肺泡上皮细胞上皮间质转化的作用机制探讨：①干扰TBK1，观察辐射诱导EMT细胞模型中EMT相关转录因子的变化；②TBK1作用可能相关信号通路探讨。

实验方法： 1、采用人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)和大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN)，对其进行2、4、6、8、10Gy60Co 寻找更多 γ射线照射，通过Western Blot (WB)实验技术，检测EMT标志物，建立辐射诱导EMT细胞模型； 2、通过WB检测辐射对细胞TBK1表达水平的影响； 3、利用lipo2000脂质体转染法干扰细胞中TBK1的表达，用WB及Real-time-PCR检测转染效果； 4、干扰TBK1，通过WB，免疫荧光实验检测EMT标记物变化，评价TBK1对IR诱导EMT影响； 5、干扰TBK1，采用Real-time PCR和WB检测EMT相关转录因子的变化；以及过表达转录因子ZEB1对TBK1调节IR诱导EMT的效应； 6、干扰TBK1，采用Real-time PCR检测照射后细胞TGF-β表达变化；通过WB实验，观察TGF-β/Smad3通路是否参与TBK1的调节； 7、干扰TBK1，采用WB检测照射后细胞NF-κB通路表达变化，观察其是否参与TBK1的调节； 8、干扰TBK1，采用WB检测照射后细胞GSK-3β的表达变化，通过给予GSK-3β特异性抑制剂SB216763，观察GSK-3β在TBK1调节IR诱导EMT中的作用；联合过表达转录因子ZEB1，探讨TBK1和GSK-3β的关系。 9、统计方法：采用t检验；方差分析等， P＜0.

01）。高脂饮食糖尿病组大鼠给予2%STZ腹腔注射后出现精神萎靡，毛色发黄，无光泽，饮水量、尿量较给药前明显增加。腹腔注射第七天，糖尿病组大鼠体重明显下降，血糖明显高于正常组（P<0.01），其中D-I／R组比N-I／R组AI升高更明显（P<0.01）。N-P、D-P与相应I／R组相比AI降低（P<0.01），其中N-P比D-P组下降更明显（P<0.01）。给予Wortmanmin再灌注后N-W组、D-W组AI与相应I／R组无显著差别，而与相应P组有显著差别（P<0.01）。其中D-I／R组比N-I／R组caspase-3、Bax、细胞色素C表达增多，Bcl-2表达减少更明显（P<0.01）。N-P组、D-P组与相应I／R组相比caspase-3、Bax、细胞色素C表达减少，Bcl-2表达增多（P<0.01），其中N-P组比D-P组caspase-3、Bax、细胞色素C表达减少，Bcl-2表达增多更明显（P<0.01）。预先给予Wortmanmin再灌注后，N-W组、D-W组各凋亡蛋白的表达与I／R组无显著差别，而与相应P组有显著差别（P
研究目的：

1.研究七氟醚预处理是否有延迟性心肌保护作用； 2.探讨线粒体ATP敏感性钾通道(mito-KATP)和线粒体通透性转换孔(MPTP)在七氟醚预处理的延迟性心肌保护作用中角色； 3.观察七氟醚预处理24小时后对大鼠心肌线粒体蛋白质组的影响； 4.电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氧酶(NADH-DH)在七氟醚预处理后的表达改变。 研究方法研究分为四部分： 1.七氟醚预处理是否有延迟相的减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用。健康雄性SD大鼠随机分为4组(n=12)：假手术组(SHAM组)、缺血再灌注组(IR组)、七氟醚预处理后24h组(SEVO-24H组)和七氟醚预处理后48h组(SEVO-48H组)。SHAM组大鼠开胸后左冠状动脉前降支(LAD)只套线,不结扎；IR组大鼠LAD结扎阻断30min后再灌注120min；SEVO-24H组大鼠吸入2.5%七氟醚60min,24h后建立心肌缺血再灌注模型；SEVO-48H组大鼠吸入2.5%七氟醚60min,48h后建立心肌缺血再灌注模型。每组6只大鼠分别记录各组缺血前(T0)、缺血30min(T1)、再灌注30min(T2)、再灌注60min(T3)和再灌注120min(T4)时刻心率(HR)、平均动脉压(MAP)并计算心率收缩压乘积(RPP);再灌注结束后取颈内动脉血测定肌钙蛋白(cTnl),然后处死动物,伊文氏蓝和TTC染色法测心肌梗死面积。每组另6只动物于再灌注结束时电镜下观察各组心肌超微结构,并取心脏左室检测心肌ATP含量和分离线粒体检测线粒体呼吸控制率(RCR)；检测心肌丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性；免疫印记法检测心肌胞浆内细胞色素C(Cyto 或者 C)含量,以及心肌Bcl-2和Bax蛋白表达,分离心肌线粒体观察线粒体在200μM[Ca2+]环境下A520改变(提示线粒体肿胀程度),来判断MPTP通透性改变。2.Mito-KATI和MPTP在七氟醚预处理的延迟性心肌保护作用中角色。健康雄性SD大鼠随机分为11组(n=6)。假手术组(SHAM组)、缺血再灌注组(IR组)、七氟醚预处理组(SEVO组)、5-羟基癸酸(触发)+七氟醚预处理组[5-HD(T)+SEVO组]、5-羟基癸酸(触发)组[5-HD(T)组]、七氟醚预处理组+5-羟基癸酸(调节)+[SEVO+5-HD(M)组]、5-羟基癸酸(调节)组[5-HD(M)组]、苍术苷(触发)+七氟醚预处理组[ATR(T)+SEVO组]、苍术苷(触发)组[ATR(T)组]、七氟醚预处理+苍术苷(调节)组[SEVO+ATR(M)组]、苍术苷(调节)组[ATR(M)组]。SHAM组开胸不建立心肌缺血再灌注模型,IR组采取结扎LAD30min后再灌注120min建立在体心肌缺血.再灌注模型,SEVO组在建立心肌缺血再灌注模型前给予2.5%七氟醚吸入共60min。5-HD(T)+SEVO组、5-HD(T)组、ATR(T)+SEVO组组和ATR(T)组分别于七氟醚(氧气)吸入前10min给予5-HD(5mg/kg)或者ATR(5mg/kg)；SEVO+5-HD(M)组、5-HD(M)组.、SEVO+ATR

Fulvestrant临床试验 (M)组和ATR(M)组于LAD结扎前15min给予5-HD或者ATR。记录缺血再灌注过程中血流动力学指标HR、MAP和计算RPP,再灌注结束时比较各组心肌梗死面积和血清肌钙蛋白(cTnl)水平,电子显微镜下观察心肌超微结构。 3.观察2.5%七氟醚预处理2/4小时后对大鼠心肌线粒体蛋白质组的影响。健康雄性SD大鼠随机分为3组(n=6)。假手术组(SHAM组)、缺血再灌注组(IR组)和2.5%七氟醚预处理组(SEVO组)。IR组大鼠采取结扎LAD30min后再灌注120min建立心肌缺血再灌注模型,SEVO组大鼠吸入2.5%七氟醚(共60min)2/4h后建立心肌缺血再灌注模型,SHAM组.不建立工R模型。于再灌注120min后取心肌左室,采用差速离心结合密度梯度分离线粒体,双向凝胶电泳法(2-DE)分离线粒体蛋白质,分析凝胶图像后找出差异蛋白,并用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异蛋白,并用免疫印记法验证其中的两个蛋白电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADH-DH)。

BGB324浓度 4.电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADH-DH)在七氟醚预处理后表达变化。健康雄性SD大鼠随机分为7组(n=12)。假手术组(SHAM组)、缺血再灌注组(IR组)、七氟醚预处理组(SEVO组)、mitoKATP|沮断剂5-HD(5mg/kg)+七氟醚预处理组(5-HD+SEV0组)、活性氧清除剂2-MPG (20mg/kg)+七氟醚预处理组(MPG+SEVO组)、单独5-HD组和MPG组。5-HD组和2-MPG组均在七氟醚(或者氧气)吸入前10min静脉给予,每组6只大鼠于七氟醚(或氧气)预处理后/4h采用RT-PCR检测心肌VDAC1和NADH-DH的mRNA表达。除SHAM组外,其它各组大鼠于24h后采用结扎LAD的方法建立在体缺血再灌注模型,缺血30min后再灌注120min。再灌注120结束时检测心肌梗死面积和血清cTnI,电镜下观察心肌超微结构,Western blot法检测心肌VDAC1和NADH-DH,以及Bcl-2和Bax表达。 研究结果： 1.除SHAM组外,其它各组大鼠心肌缺血再灌注过程中HR、MAP和RPP均下降,但是各时间点组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与SHAM组比较,IR组心肌缺血再灌注后显示明显的心肌梗死面积和心肌cTnI释放(P<0.05)。而七氟醚预处理后24h和48h均能够减少缺血再灌注后心肌梗死而积和cTnI释放,电镜下观察心肌损伤亦减轻(与IR组比较,P0.05)。 2.应用2.

67)可促进成骨细胞BMP和Cbfa1基因的表达,抑制间充质细胞的成脂分化;可通过发挥雌激素样作用,增加去卵巢大鼠的骨形成、抑制骨吸收。这些结果都暗示:淫羊藿苷可作为一种骨诱导活性因子用于骨再生研究。此外,淫羊藿苷来源广泛、提取工艺相对简单、性质稳定、易于储存、可耐受消毒灭菌,这些特性亦为组织工程支架材料的载药提供了方便。 目的

1.研究传统中药淫羊藿有效药理成分——淫羊藿苷对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow-derived mesenchymal stem cells,hBMSCs)增殖和成骨分化等生物学行为的影响,探讨其促进成骨分化的作用机制,评价淫羊藿苷作为一种新型成骨诱导信号分子替代生长因子应用于骨组织工程的可行性; 2.构建仿生组装淫羊藿苷—壳聚糖/羟基磷灰石(淫羊藿苷—CS/HA)骨修复材料,探讨其理化性质和生物相容性; 3.研究淫羊藿苷—CS/HA复合材料的体外释药行为和释药动力学; 4.研究淫羊藿苷—CS/HA复合材料的体内成骨效能。 方法 1.淫羊藿苷对hBMSCs成骨分化的影响和机制研究 hBMSCs的分离培养和鉴定健康志愿者经知情同意后,于髂骨抽取骨髓,经全骨髓培养、扩增后,对第二代细胞进行表型标志物鉴定和成脂、成软骨和成骨三向诱导,取第3代细胞用于试验。淫羊藿苷的细胞毒性试验将hBMSCs接种至96孔板中进行培养,5000细胞/孔,贴壁后加入150μl浓度为10~(-9)M～2.0×10~(-4)M的淫羊藿苷培养基和0.05%(v/v)DMSO培养基进行培养,用普通培养基作为对照,干预48h后采用MTT法检测各浓度淫羊藿苷对hBMSCs活力的影响。细胞增殖试验将hBMSCs接种于96孔板中进行培养,2000细胞/孔,贴壁后吸出原培养基,分别加入150μl浓度为10~(-9)～10~(-4)M的淫羊藿苷培养基进行培养,以DMSO培养基作为对照。于加液后第1、3、5、7和9d MTT法测定OD值,绘制细胞生长曲线。hBMSCs成骨分化试验将hBMSCs植入6孔板中进行培养,2×10~7细胞/孔,贴壁后加入1.5ml浓度为10~(-9)M～10~(-4)M的淫羊藿苷培养基进行培养,以DMSO培养基作为阴性对照,rhBMP-2培养基作为阳性对照。于加液后3、7、11d裂解细胞,采用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒和BCA试剂盒分别检测ALP和蛋白浓度,根据公式ALP(U/g)=ALP/总蛋白量换算ALP含量;同上法培养细胞,于7、14、21d裂解细胞,骨钙素(OCN)Elisa试剂盒检测OCN表达量;采用NBT/BCIP染液对培养11d的hBMSCs进行ALP染色;采用茜素红染液对培养28d的hBMSCs进行钙化结节染色并定量。淫阳藿苷促进hBMSCs成骨分化的机制研究将hBMSCs植入6孔板中进行培养,2×10~7细胞/孔,贴壁后加入DMSO培养基、10~(-6)M淫羊藿苷培养基、rhBMP-2培养基和10~(-6)M淫羊藿苷+rhBMP-2培养基进行培养。分别于1、4、7d采用RT-PCR方法对成骨相关基因ALP、OCN、OPN、Col-Ⅰ、Cbfa1、BMP-2、BMP-4和BMP-7mRNA的表达进行检测。将hBMSCs植入φ10cm培养皿中进行培养,5×10~7细胞/皿,贴壁后加入4ml

Metformin研究购买 Tofacitinib体内 DMSO培养基、10~(-6)M淫羊藿苷培养基、rhBMP-2培养基和淫羊藿苷+rhBMP-2培养基连续培养14d,经提取总蛋白后进行Westernblot检测成骨相关蛋白Cbfa1、OCN、BMPs的表达;细胞爬片后进行OCN免疫细胞荧光检测。 2.仿生组装淫羊藿苷-CS/HA骨修复材料的构建 仿生组装CS/HA复合材料的构建、表征和生物相容性采用原位复合和冷冻干燥方法制备CS/HA复合材料,通过扫描电镜(SEM)、切片染色观察材料的孔隙结构,采用常规方法评估材料的密度、孔隙率、孔径;采用X线衍射仪(XRD)和傅立叶红外光谱(FTIR)分析材料的理化性质;制备材料浸提液,采用MTT法观察其对hBMSCs增殖的影响,将hBMSCs接种至材料表面,分别于第3d和第10d采用SEM观察细胞的数量和形态;将CS/HA复合材料植入新西兰兔背部肌袋,分别于术后1、4、8、12 w行组织切片观察材料的组织相容性和降解情况。仿生组装淫羊藿苷-CS/HA骨修复材料的制备、表征和生物学相容性在CS/HA复合材料的制备过程中掺入淫羊藿苷,制备载药剂量分别为10~(-7)、10~(-6)、10~(-5)mol的淫羊藿苷-CS/HA复合材料。采用同上方法分析淫羊藿苷-CS/HA复合材料的理化性质,万能材料试验机测试材料的力学性能;制备材料浸提液,采用MTT法观察其对不同密度接种的hBMSCs增殖和成骨分化(ALP表达)的影响,采用SEM对其表面接种10d的细胞进行观察;通过溶血试验考查淫羊藿苷-CS/HA复合材料对红细胞的影响;通过热原试验考查淫羊藿苷-CS/HA复合材料热原性。

Selleckchem Ivacaftor 3.仿生组装淫羊藿苷-CS/HA骨修复材料的体外释药行为 将载药量分别为10~(-7)、10~(-6)、10~(-5)mol的淫羊藿苷-HA/CS材料置于盛有5mlPBS的密闭玻璃离心管中,37℃恒温振荡,分别于1、2、3、10、15、20、30、60、90 d定时收集全部溶液进行超高效液相色谱(UPLC)检测。通过精密度试验、重复性试验、加样回收率试验、稳定性试验考查设备的精密度、灵敏度和淫羊藿苷的稳定性,通过标准曲线换算供试品每次释药量,并将其进行累积绘制成释药曲线;采用Logarithmic模型对释药行为进行曲线拟合。 4.仿生组装淫羊藿苷-CS/HA骨修复材料的体内成骨效能 60只雄性新西兰大白兔随机分为5组(n=12),麻醉后于右侧桡骨中段截骨制作长度为1.5 cm的骨缺损模型,将CS/HA和载10~(-7)、10~(-6)、10~(-5)mol淫羊藿苷—CS/HA复合材料随机植入骨缺损处,骨缺损模型组不植入材料。放射性核素骨扫描(ECT)检查:术后4 w各组随机选取4只动物于耳缘静脉注射~(99m)Tc-MDP,3 h后置单光子核素扫描仪上检测骨缺损部位~(99m)Tc-MDP浓聚情况,采集结束后在图像上选取相同面积的感兴趣区域(ROI)进行定量计数,ROI均值=计数/面积。大体标本观察和X线检查:术后4、8、12 w处死动物后收集右前臂尺桡骨进行大体观察和X线拍片检查。骨密度(BMD)检查:取各组术后12 w标本行骨密度检查,于电脑上选取桡骨缺损区域并计算该区域的骨矿含量(BMC),BMD(g/cm~2)=BMC/选取面积。组织学观察:各时间点组织标本经固定、脱钙、切片后行HE染色观察。 结果 1.淫羊藿苷对hBMSCs成骨分化的影响和机制研究 全骨髓培养的第二代hBMSCs表面标志物鉴定结果分别为:CD29(93.

In metastatic disease the addition of trastuzumab to chemotherapy is standard of care in Her2 positive disease. In the HER2 negative

population,the treatments remain limited.In the first line setting,the standard of care is a combination of fluoropyrimidine and platinum containing chemotherapy,with or without epirubicin or docetaxel.The results of targeted therapy trials have by and large been disappointing,but none of these trials looked at an appropriately enriched population.Finally there is a meager overall survival benefit in treating patients with metastatic disease in the second line setting,with either irinotecan,docetaxel or ramucirumab however none of these drugs NU7441 have been compared head to head in a well-powered randomized controlled trial.
目的:建立荧光原位杂交方法(fluorescent in situ hybridization,FISH)检测ROS1基因重排,评价检测试剂在临床样本中的检测情况。方法:依据ROS1断裂重排方式,设计、制备双色荧光探针。以人外周血培养细胞为检测对象评价ROS1基因重排检测探针的灵敏度和特异性,建立阴性阈值。以NSCLC患者的肿瘤组织样本为对象进行ROS1重排检测及性能评价。结果:建立的FISH方法在人外周血培养细胞检测中特异性和灵敏度均达到100%,在对192例临床样本制备的高密度组织芯片的检测中,筛查出1例ROS1

FISH阳性样本。结论:本研究制备的双色荧光探针可用于ROS1基因重排检测。通过ROS1重排检测,将有助于临床方案制定,辅助个体化治疗。
目的探讨分子生学标记物与重组人血管内皮抑制素靶向治疗非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)疗效之间的关系。方法选择符合要求的非小细胞肺癌患者68例,随机均分为A组和B组,每组34例。A组采用多西他赛+顺铂(docetaxel GW786034订单 and cisplatin,DP)及吉非替尼化疗,B组在A组化疗方案的基础上加用重组人血管内皮抑制素。采用免疫组化的方法检测表皮生长因子受体(epidermao growth factor receptor,EGFR)、KRAS基因(K-ras,p21)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)、乳腺癌1号基因(breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)、棘皮动物微管相关类蛋白4与间变性淋巴瘤激酶融合基因(echinoderm mierotubule-associated protein-like-4-anaplastic lymphoma kinase,EML4-ALK)、核苷酸切除修复交叉互补1(excision repair cross complementing 1,ERCC1)、β-微管蛋白和分化抗原簇3(Cluster of differentiation 3,CD3)生物学标记物的表达情况。结合2组患者生物学标志物的表达情况和无进展生存期(progression free survival,PFS),统计出适合不同方案的人群类型。结果 B组的中位PFS较A组显著延长;无论VEGF和BRCA1低表达或高表达,B组的中位PFS较A组显著提高;ERCC1、KRAS、EML4-ALK和β-微管蛋白高表达,B组的中位PFS较A组有显著提高;EGFR和CD3低表达,B组的中位PFS较A组显著延长(P<0.05)。结论VEGF和BRCA1高表达或低表达,KRAS、ERCC1、EML4-ALK和β-微管蛋白高表达及EGFR和CD3低表达的非小细胞肺癌患者对DP及吉非替尼联合重组人血管内皮抑制素靶向治疗较为敏感。
肺癌脑转移是肺癌晚期严重并发症,其中大部分为非小细胞肺癌来源。目前对非小细胞肺癌脑转移若不治疗,整体生存中位时间约2~3个月。传统治疗包括:系统性化疗、全脑放疗、立体定向伽马刀放射治疗及手术切除,但患者总体生存中位时间也不超过1年。近几年,大量临床资料显示靶向治疗用于非小细胞肺癌脑转移能显著改善患者的预后及生存时间,但随着治疗时间的延长,几乎都出现耐药现象,耐药机制有待进一步研究。本文就非小细胞肺癌脑转移靶向治疗及耐药机制的研究进展进行综述。
恶性肿瘤基础与临床的相关研究成果正日新月异地推动着临床肿瘤学的发展与进步。因此,在现有基础上,有必要对高等医学院校临床医学生进行更为系统、全面、优化的《临床肿瘤学》理论与实践相关内容的教学。全文就如何构建完善的《临床肿瘤学》教学体系,包括国内外教学研究趋势、教学内容、教学方法等提出一点建议。
外周T细胞及自然杀伤细胞(T/NK)淋巴瘤是一组少见而又异质、以侵袭性强为特征的恶性肿瘤。由于对该组疾病的病理生物学、特别是遗传和分子生物学改变所知甚少,当前世界卫生组织(WHO)分类根据临床表现将其定义的诸多病种归类到白血病、皮肤肿瘤、结外病变以及淋巴结病变这几组疾病之中。近年来,有关T/NK细胞的亚群构成以及细胞分化方面的研究进展有助于我们更深入了解这些肿瘤的生物学特性。此外,一些新的遗传学改变以及信号路径调节失常也正被发现,这些分子层面的异常,不仅能用作诊断和预后标志物,还是研发治疗新措施的潜在靶点。
在晚期结直肠癌的疗效评价中,总生存期(overall

AZD6244分子重量 survival)、无进展生存期(progression free survival)及基于实体瘤的疗效评价、生活质量及药物不良反应等疗效评价标准在临床中已得到了广泛的运用,但是在临床使用中其各自的疗效评定价值及意义却各不相同.同时,随着分子靶向药物及新的治疗方法的开展,现有疗效评价标准的缺点也不断的显露出来.因此,探索能够早期有效反映药物及治疗方法有效性的疗效评定指标成为必然.