干预HSC的研究主要有:干扰细胞信号转导通路,抑制炎症反应,对抗氧化应激,调节相关细胞因子活性等.本文综述了P38 MAPK信号通路的主要功能、常见研究方法及对肝纤维的作用机制,以期为实验研究提供思路.
目的:二烯丙基二硫(DADS)为天然植物大蒜中的提取物,能抑制多种肿瘤细胞生长,本文探讨丝裂原激活的蛋白激酶(MAPKs)、3-磷酸肌醇激酶(PI3K/Akt)信号通路和Bcl-2家族成员在DADS诱导的人白血病HL-60细胞凋亡中的作用。方法:利用流式细胞术检测DADS诱导的白血病细胞凋亡,Western blot研究MAPKs和PI3K/Akt信号通路在DADS诱导的人白血病HL-60细胞凋亡中的变化及对Bcl-2家族凋亡相关蛋白表达的影响。结果:DADS呈浓度和时间依赖性地诱导人白血病HL-60细胞凋亡,在此过程中ERK/MAPK和PI3K/Akt信号通路被抑制,而p38MAPK信号通路被激活,ERK/MAPK和PI3K/Akt信号通路通过降低Mcl-1(myeloid

cell leukemia-1)和升高Bax的表达诱导人白血病细胞凋亡,而p38MAPK则不是通过调控Mcl-1和Bax的表达诱导人白血病细胞凋亡,进一步利用RNA干扰技术沉默Mcl-1基因可增加DADS对HL-60细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。结论:MAPK和PI3K/Akt信号通路通过下调Mcl-1的表达参与了DADS诱导的HL-60细胞凋亡作用。
目的探讨不规则趋化因子(FKN)在动脉粥样硬化形成中的作用及其可能的信号转导途径,以及FKN影响人单个核细胞表达NFκB过程与Ras/p38丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路的相关性。方法采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,将细胞预处理后分为:空白1组、FKN 1组、FKN+Ras抑制剂组(FTI-277组)、空白2组、FKN 2组、FKN|p38抑制剂组(SB203580组)。分别于30 点击此处 min时,采用Western blot方法对磷酸化p38及NF-κB进行半定量测定。结果与空白1组、空白2组比较,FKN 1组、FKN 2组NF-κB和p38相对吸光度值明显增加(P
mTOR是处于调节细胞代谢、生长、增殖等整个过程中心环节的重要激酶。干扰或抑制mTOR会引起细胞尤其是癌细胞的生长停滞继而死亡,因而也被公认为是癌症治疗当中的一个潜在靶标。一系列的mTOR抑制剂Rapamycin及类似物已经形成并在临床抗肿瘤中有所应用,但其展示的效应非常有限。随着研究的深入,发现mTOR信号通路存在反馈激活机制:即抑制mTOR能反馈性激活多个与细胞生长增殖相关的信号通路。并且认为是这些反馈激活机制削弱了mTOR抑制剂的效能,也是其临床效应未达预期的原因。本文就目前国内外研究较深入的mTOR-AKT,mTOR-ERK,mTOR-eIF4E反馈信号通路做详细概述,并阐述目前采取的防止这一反馈机制形成的Rapamycin类似物与特定通路抑制剂的联合用药策略,使mTOR抑制剂在临床抗肿瘤中能充分发挥其效能。
p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径是成肌细胞分化过程中重要的调节途径。p38

M APK蛋白在成肌细胞分化过程中受上游丝裂原活化蛋白激酶激酶3(M KK3)、丝裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)的激活而活化其下游成肌分化蛋白(MyoD)、肌生成素5(Myf5)、肌形成蛋白(myogenin)、肌肉调节因子4(MRF4)等肌肉调节因子。p38 MAPK信号途径的活化可以进一步增加骨骼肌纤维细胞蛋白含量,增加肌纤维长度和横截面直径,使骨骼肌纤维在数量不变的前提下质量大幅度提高,本文就p38 {TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂| buy TNF-alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂半抑制浓度|TNF-alpha 抑制剂价格|TNF-alpha 抑制剂花费|TNF-alpha 抑制剂溶解度|TNF-alpha 抑制剂购买|TNF-alpha 抑制剂制造商|TNF-alpha 抑制剂查找购买|TNF-alpha 抑制剂订单|TNF-alpha 抑制剂 mouse|TNF-alpha 抑制剂 chemical structure|TNF-alpha 抑制剂分子量|TNF-alpha 抑制剂 molecular weight|TNF-alpha 抑制剂数据表|TNF-alpha 抑制剂 supplier|TNF-alpha 抑制剂体外|TNF-alpha 抑制剂细胞系|TNF-alpha 抑制剂 concentration|TNF-alpha 抑制剂 nmr|TNF-alpha 抑制剂体内|TNF-alpha 抑制剂 clinical trial|TNF-alpha 抑制剂s|TNF-alpha signaling 抑制剂|TNF-alpha pathway 抑制剂|TNF-alpha 信号通路 抑制剂|TNF-alpha signaling 抑制剂s|TNF alpha pathway 抑制剂s|TNF-alpha 信号通路 抑制剂s|TNF-alpha 抑制剂 library|TNF-alpha activity inhibition|TNF-alpha activity|TNF-alpha inhibition|TNF-alpha 抑制剂s library|TNF alpha 抑制剂 libraries|TNF-alpha 抑制剂 screening library|TNF-alpha high throughput screening|TNF-alpha 抑制剂s high throughput screening|TNF-alpha phosphorylation|TNF-alpha screening|TNF-alpha assay|TNF-alpha animal study| AG-14361化学结构 MAPK信号途径调节骨骼肌生长发育的机理进行综述。
AIM:To

examine how high-mobility group box 1 (HMGB1) regulates hepatocyte apoptosis and,furthermore,to determine whether glycyrrhizin (GL),a known HMGB1 inhibitor,prevents HMGB1-induced hepatocyte apoptosis.METHODS:A human hepatocellular carcinoma cell line stably transfected with a bile acid transporter (HuhBAT cells),were used in this study.Apoptosis was quantified using 4′,6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride staining and the APO Percentage apoptosis assay,and its signaling cascades were explored by immunoblot analysis.Kinase signaling was evaluated by immunoblotting and by using selective inhibitors.It is also tried to identify hepatocyte apoptosis affected by the HMGB1 inhibitor,GL.RESULTS:HMGB1 increased cellular apoptosis in HuhBAT cells.HMGB1 led to increased cytochrome c release from mitochondria into the cytosol,and induced the cleavage of procaspase 3.However,it did not affect the activation of caspase 8.HMGB1-induced caspase 3 activation was significantly attenuated by the p38 inhibitor SB203580.GL significantly attenuated HMGB1-induced hepatocyte apoptosis.GL also prevented HMGB1-induced cytochrome c release and p38 activation in Huh-BAT cells.

674,P=0.005)。(3)通过AliBaba2.1转录因子预测软件预测EGF G61A位点前后序列的转录结合因子结合情况发现,G等位提供了更多的转录因子SP1的顺式作用原件。 结论: (1)EGF外显子区域的单核苷酸多态性位点:外显子1中的S16R、外显子8中的R431K、外显子14中的I708M、外显子15中的D784V,同HCC的发生之间不存在遗传学关联。 (2)EGF 5’调控区的G61A同肝癌的发生显著相关。A等位可能通过等位特异的方式,降低EGF基因的转录使表皮生长因子的表达量下降,使肝癌的发生风险降低。我们的结果提示EGF基因的遗传多态性在肝癌的发生中发挥重要的作用。
目的 恶性肿瘤发生远处转移是肿瘤患者病程进展、致残和致死的主要原因。侵袭性是指肿瘤细胞侵入邻近组织的能力,该过程是恶性肿瘤的主要特征,亦是其发生转移的第一步。与肿瘤细胞侵袭性和发生转移相关的机制极为复杂,目前人们已经对该过程中的一些蛋白水解酶和原癌基因有了初步认识,如与细胞微环境中细胞外基质降解相关的基质金属蛋白酶-2以及与肿瘤侵袭性生长相关的原癌基因c-met。另一方面,开发具有抗癌作用的天然小分子无机化合物是目前抗肿瘤药物研发的一个热点。本文旨于研究轻稀土化合物氯化镧对肿瘤细胞增殖、侵袭和转移的作用,分别以与肿瘤侵袭和转移相关的蛋白水解酶和原癌基因为靶点,进一步阐明稀土对肿瘤细胞作用的作用机制,扩大稀土化合物的应用领域,为临床抗肿瘤药物的研发提供新方向。

而且 方法 (1)采用MTT法观察轻稀土化合物氯化镧对乳腺癌细胞MCF-7及人纤维肉瘤细胞HT-1080的毒性作用。 (2)采用侵袭性试验探讨氯化镧对人纤维肉瘤细胞HT-1080侵袭性的影响。 (3)通过明胶酶谱法和Western Blot测定低剂量氯化镧(≤20μmol/L)对人纤维肉瘤细胞HT-1080细胞基质金属蛋白酶-2表达和活性的影响。 (4)应用RT-PCR法,分别调查低剂量氯化镧对肿瘤细胞HT-1080细胞基质金属蛋白酶-2转录的影响(≤20μmol/L)以及对乳腺癌细胞MCF-7原癌基因c-met转录的影响(≤100μmol/L)。 (5)构建Luciferase基因报告系统,应用PCR技术合成MMP-2启动子区域的突变位点,探讨轻稀土化合物对人纤维肉瘤细胞株HT-1080 MMP-2的作用机制。 结果 (1)细胞毒性试验表明,轻稀土化合物氯化镧浓度低于50μmol/L时,氯化镧无论对MCF-7细胞株还是HT-1080细胞株的生长均无抑制作用。随着浓度增加,氯化镧对肿瘤细胞的增殖出现抑制作用,且抑制作用随浓度的增加而增强;但是当氯化镧浓度过大(＞400μmol/L)时,氯化镧对肿瘤细胞增殖的抑制作用不再出现浓度依赖性。此外,不同细胞对氯化镧的敏感性不同,人纤维肉瘤细胞株HT-1080对氯化镧的敏感性更高。 为什么 (2)通过侵袭性试验表明,在对肿瘤细胞生长无明显作用的浓度范围内(＜50μmol/L),氯化镧对肿瘤细胞的侵袭性有抑制作用,且抑制作用随氯化镧浓度的增加而增强。 (3)通过明胶酶谱法和Western Blot试验证实,对肿瘤生长无抑制作用的浓度范围(＜50μmol/L)的氯化镧可抑制pro-MMP-2的活性及含量,但是其对活化形式的MMP-2无抑制作用。 (4)应用RT-PCR法,进一步观察了低浓度氯化镧对原癌基因c-met和蛋白水解酶MMP-2基因转录的作用。低浓度氯化镧可以下调c-met以及MMP-2的基因转录,并且抑制作用随氯化镧浓度的增加而增强。

(5)通过Luciferase报告系统以及启动子突变的方法测定MMP-2的启动子活性,证实氯化镧通过作用于人纤维肉瘤细胞HT-1080 MMP-2启动子区的CREB结合位点,阻断了PKA/CREB通路而抑制该细胞MMP-2mRNA的转录并降低MMP-2的分泌,从而降低了肿瘤细胞的侵袭性。 结论 不同浓度的轻稀土化合物氯化镧对肿瘤细胞的作用不同,高浓度氯化镧(＞100μmol/L)可抑制肿瘤细胞的增殖,低浓度的氯化镧(＜50μmol/L)对肿瘤细胞的侵袭性有一定抑制的作用。同一浓度的氯化镧对不同肿瘤细胞的增殖作用不同。低浓度的氯化镧通过抑制与肿瘤侵袭性相关的蛋白水解酶(MMP-2)的转录和表达以及抑制与“侵袭性”生长相关的原癌基因c-met表达,降低了肿瘤的侵袭性。这为未来临床个体化治疗提供了初步依据,亦为扩大稀土资源在医药领域的应用提供了新方向。
目的:检测mTOR/P70S6K信号通路中mTOR和P70S6K在肝细胞肝癌组织(HCC)中的表达,探讨其在HCC发生、发展中的作用及临床意义。

方法:选取20例HCC组织及相应癌旁组织,10例正常肝组织。采用两步法提取总RNA, RT-PCR法检测mTOR及P70S6K mRNA在HCC组织和相应的癌旁组织及正常肝组织中的表达情况,并分析mTOR及P70S6K mRNA的表达与相关临床病理参数的关系。 结果: 1)mTOR mRNA在HCC组织中的表达水平(0.594±0.218)明显高于癌旁组织(0.437±0.156)及正常肝组织(0.383±0.081)(P
目的: 舌部鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)是颌面外科较常见的肿瘤,其发病率,致死率位于口腔癌的首位,舌癌的恶性程度高,浸润性强并易早期发生淋巴结转移,预后较差,术后常继发畸形,对患者的生存质量造成极大的影响。自分泌运动因子受体(autocrine motility factor receptor,AMFR)能刺激下游区域的信号传导通路导致细胞运动的上调,致其随机和定向运动。肝细胞生长因子(heptaocyte CFTR inhibitor细胞系 growth factor,HGF),其受体是由原癌基因C-Met编码产生的跨膜蛋白,与人类许多肿瘤的生长,侵袭及转移密切相关。本实验通过免疫组化SP法检测正常舌体组织及舌癌中AMFR、C-Met的表达,并分析其表达与临床病理特征之间的关系。 材料与方法: 1.选取正常舌体组织(normal tongue tissue ,NOM )10例、TSCC 80例,收集性别、年龄、肿瘤部位、病理分级、淋巴结转移及临床分期等资料。 2.采用免疫组化SP法检测10例NOM、及80例TSCC石蜡切片中AMFR和C-Met的表达。正常舌体组织作对照。 3.统计分析NOM及TSCC中AMFR和C-Met表达的差异;分析AMFR和C-Met蛋白的表达与TSCC各临床病理参数之间的关系,探讨AMFR和C-Met表达水平之间的关系。 结果: 1.在TSCC组织中,AMFR阳性表达在癌细胞的细胞质和胞膜,有个别的病例偶见核阳性,阳性率为:76.25%,其中阳性(+):32例(40%);强阳性(++):29例(36.25%),在NOM中不表达。在TSCC中AMFR高表达与舌癌的TNM有关(P0.05)。 2.

通过观察舒脉胶囊对实验性大鼠缺血心肌组织学、形态学及超微结构的改变、整体与局部心功能、α-SMA蛋白表达、及collagenⅠmRNA与蛋白表达的影响,探讨舒脉胶囊减少心肌成纤维细胞增殖、降低心肌纤维化、及改善左室重构的疗效。 2.观察舒脉胶囊对实验性大鼠缺血心肌磷酸化应激激活细胞丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、TNF-α、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1蛋白表达的影响,探讨舒脉胶囊改善左室重构的机制。 {TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂|TNF alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂| buy TNF-alpha 抑制剂|TNF-alpha 抑制剂半抑制浓度|TNF-alpha 抑制剂价格|TNF-alpha 抑制剂花费|TNF-alpha 抑制剂溶解度|TNF-alpha 抑制剂购买|TNF-alpha 抑制剂制造商|TNF-alpha 抑制剂查找购买|TNF-alpha 抑制剂订单|TNF-alpha 抑制剂 mouse|TNF-alpha 抑制剂 chemical structure|TNF-alpha 抑制剂分子量|TNF-alpha 抑制剂 molecular weight|TNF-alpha 抑制剂数据表|TNF-alpha 抑制剂 supplier|TNF-alpha 抑制剂体外|TNF-alpha 抑制剂细胞系|TNF-alpha 抑制剂 concentration|TNF-alpha 抑制剂 nmr|TNF-alpha 抑制剂体内|TNF-alpha 抑制剂 clinical trial|TNF-alpha 抑制剂s|TNF-alpha signaling 抑制剂|TNF-alpha pathway 抑制剂|TNF-alpha 信号通路 抑制剂|TNF-alpha signaling 抑制剂s|TNF alpha pathway 抑制剂s|TNF-alpha 信号通路 抑制剂s|TNF-alpha 抑制剂 library|TNF-alpha activity inhibition|TNF-alpha activity|TNF-alpha inhibition|TNF-alpha 抑制剂s library|TNF alpha 抑制剂 libraries|TNF-alpha 抑制剂 screening library|TNF-alpha high throughput screening|TNF-alpha 抑制剂s high throughput screening|TNF-alpha phosphorylation|TNF-alpha screening|TNF-alpha assay|TNF-alpha animal study| 方法 1.研究对象 建立大鼠心肌梗死实验模型Wistar大鼠结扎左冠状动脉前降支建立心肌缺血模型。造模方法同第一部分。造模成功的大鼠随机分为舒脉大剂量组(SMCH)、舒脉小剂量组(SMCL)、p38MAPK抑制剂SB203580(SB)、模型组(MIR);另设假手术组(Sham)。每组24只,1、6周每个时间段各12只。 2.研究内容 (1)超声心动检测;(2)放射免疫法检测血浆TNF-α含量;(3)Western blot检测缺血心肌磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、TNF-α、TIMP-1蛋白表达;(4)实时定量RT-PCR检测缺血心肌collagenⅠmRNA表达;(5)免疫组化染色检测缺血心肌collagenⅠ、α-SMA蛋白表达;(6)HE染色;(7)天狼猩红染色检测胶原含量的变化;(8)透射电镜观测心肌超微结构变化。

结果 1.左心室整体与局部功能超声心动图分析 在治疗后第1、6周时进行了超声检查。左室射血分数(LVEF)是目前临床上评价左心室整体功能最常用的指标。治疗第1周后,SMCH组、SMCL组、SB组的LVEF、BW较MIR组显著增高(P＜0.05),而LVESD、LVEDD、LVW/BW较MIR组显著降低。局部室壁增厚率(WT)可用来反应心肌局部功能。治疗第1周后,SMCH组、SMCL组、SB组的WT较MIR组显著增高(P＜0.05)。进一步组间两两比较发现,应用大剂量舒脉胶囊组(SMCH)较小剂量舒脉胶囊组(SMCL)或SB组WT无显著性差异(P＞0.05)。 治疗第6周后,SMCH组、SMCL、SB组的LVEF、BW、WT较MIR组显著增高(P＜0.05),LVESD、LVEDD、HW/BW较MIR组显著降低(P＜0.05)。进一步两两比较分析,SMCH较SMCL组LVEF、WT增高,SMCH组LVESD、LVEDD、HW/BW较SMCL组降低(P＜0.05)。SMCH组较SB组各指标差异差别无统计学意义(P＞0.05)。 AG-14361研究购买 2.血浆TNF-α水平的测定 通过放免法检测SMC的抗炎症的作用。治疗1周后,MIR组、SMCH组、SMCL组血浆TNF-α水平较Sham组明显升高。但是,SMCH组、SMCL组(剂量依赖性)、SB组血浆TNF-α水平较MIR组明显降低(P＜0.05)。治疗6周后SMCH组、SMCL组、SB组血浆TNF-α水平较MIR组降低(P＜0.05),且较1周时血浆TNF-α水平降低。

3.Western blot检测分析 治疗1周后,MIR组大鼠心肌组织p-p38MAPK、TNF-α、TIMP-1蛋白的表达较Sham组明显增加。SMCH、SMCL、SB组心肌组织p-p38MAPK、TNF-α、TIMP-1蛋白表达较MIR组明显减少。进一步两两比较分析,SMCH组较SMCL组或SB组心肌组织p-p38MAPK、TNF-α、TIMP-1蛋白表达差异无显著性意义(P＞0.05)。治疗6周后,SMCH、SMCL、SB组心肌组织p-p38MAPK、TNFα、TIMP-1蛋白表达较MIR组明显减少(P＜0.05)。进一步两两比较分析,SMCH组较SMCL组心肌组织p-p38MAPK、TNF-α、TIMP-1蛋白表达减少(P＜0.05)。SMCH组较SB组心肌组织p-p38MAPK、TNF-α、TIMP-1蛋白表达差异无显著性意义(P＞0.05)。除外Sham组,各组心肌组织p-p38MAPK、TNF-α、TIMP-1蛋白的表达较1周时明显降低。

4.实时定量RT-PCR 通过实时定量RT-PCR检测大鼠心肌组织collagenⅠmRNA的表达。治疗1周后,MIR组大鼠心肌组织collagenⅠmRNA的表达较Sham组明显增加(P＜0.05)。SMCH、SMCL、SB组心肌组织collagenⅠmRNA表达较MIR组明显减少(P＜0.05)。进一步两两比较分析,SMCH组较SMCL组或SB组心肌组织collagenⅠmRNA表达差异无显著性意义。治疗6周后,SMCH、SMCL、SB组心肌组织collagenⅠmRNA表达较MIR组明显减少。进一步两两比较分析,SMCH组较SMCL组心肌组织collagenⅠmRNA表达减少。SMCH组较SB组心肌组织collagenⅠmRNA表达差异无显著性意义。 5.免疫组化染色分析 5.1α-SMA表达 α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)是检测CFs增殖的可靠指标。通过免疫组化染色法可使阳性指标呈棕色或棕黄色染色。α-SMA主要表达于VSMC与CFs中。结果表明,Sham组大鼠只在心肌VSMC中有表达。而在MIR组,α-SMA广泛表达,并见有密集的阳性表达的CFs核聚集。舒脉胶囊与SB203580均明显降低α-SMA在心肌组织的广泛表达,表明其具有抑制CFs增殖的作用。6周时,除了Sham组,各组α-SMA表达较1周时增加。 查找更多 5.2 CollagenⅠ表达 治疗1周后,通过免疫组化检测到MIR组心肌间质中较Sham组明显增多的棕褐色阳性表达。SMCH、SMCL、SB治疗组的Ⅰ型胶原(collagenⅠ)的阳性表达较MIR组显著降低。进一步两两比较分析,SMCH组较SMCL组或SB组心肌间质collagenⅠ的表达无显著性差异。治疗6周后,SMCH、SMCL、SB治疗组的Ⅰ型胶原(collagenⅠ)的阳性表达较MIR组显著降低。进一步两两比较分析,SMCH组较SMCL组心肌间质collagenⅠ的表达减少。SMCH组较SB组心肌间质collagenⅠ的表达无显著性差异。 6.

05)。正常的大鼠角膜基质中几乎没有P-JNK的表达,创伤后表达明显增多,SP600125能够抑制创伤后JNK通路的活化。SP600125处理后,与对照组相比,创伤诱导的大鼠角膜基质中CTGF的表达受到明显抑制,而对TGF-β1的表达没有明显影响。TGF-β1及CTGF均能促进细胞增殖;而SP600125处理后,TGF-β1促THSF细胞增殖的作用受到明显抑制。TGF-β1作用于细胞后,THSF细胞中P-JNK蛋白表达较对照组明显上调。TGF-β1刺激组细胞划伤后迁移速度明显快于对照组,而SP600125预处理后明显抑制TGF-β1促进的细胞迁移能力。TGF-β1或创伤刺激THSF细胞24h后,CTGF、FN和Col

寻找更多 Iα1 mRNA在各组中均有表达,其中创伤和TGF-β1刺激组呈高表达,而SP600125处理组表达明显降低。 结论:JNK通路参与角膜创伤愈合过程,可能介导TGF-β1上调CTGF表达和促角膜瘢痕形成的过程,深入研究明确JNK通路的作用,有望为控制角膜瘢痕的形成提供新的途径。 第三部分:RNA干扰研究JNK通路介导角膜基质中TGF-β1调控CTGF表达的作用 目的通过前期实验(第一、二部分)研究发现,TGF-β1能够通过上调CTGF表达促角膜瘢痕形成,JNK通路可能介导了TGF-β1诱导CTGF表达的过程,本研究通过RNA干扰技术阻断JNK通路,研究TGF-β1调控CTGF表达促角膜瘢痕形成的作用机制。 材料和方法体外培养THSF细胞,针对人JNK1和JNK2基因cDNA序列设计JNK1、JNK2的特异性siRNA序列。用荧光标记的阴性对照siRNA筛选转染条件,转染试剂的浓度梯度为每350μl的体系中1-4μl。按照预实验筛选的转染条件将JNK1/2siRNA转染到无血清培养液处理过的THSF细胞中,24h后收集细胞进行抑制效应分析,荧光定量PCR检测JNK1和JNK2 更多 mRNA的表达,以无血清DMEM及对照siRNA为对照。THSF细胞转染JNK1/2 siRNA成功后,采用TGF-β1(3ng/ml)或10μlTip枪头划伤刺激细胞,倒置显微镜下观察创伤愈合情况。刺激15min后采用免疫荧光检测P-NK1/2表达,24h后收集细胞检测CTGF mRNA和蛋白,Ⅰ型胶原蛋白的表达。 结果荧光显微镜观察见不同浓度的转染条件下荧光标记siRNA的转染效率均超过90%,每350μl体系中应用2μl转染试剂时转染效率最高,细胞状态好。JNK1/2siRNA转染THSF细胞后,荧光定量PCR结果示JNK1和JNK2的mRNA表达均受到明显抑制,抑制效率均超过80%。用Tip枪头划伤刺激THSF细胞后,JNK1/2siRNA干扰组细胞与对照组相比迁移速度明显减慢。免疫荧光结果显示TGF-β1刺激后,DMEM组及阴性siRNA对照组细胞中P-JNK表达明显增多,JNK通路活化;而JNK1/2

siRNh干扰组细胞中的P-JNK表达较对照组明显减少。TGF-β1及创伤刺激均能够明显促进THSF细胞中CTGF mRNA和蛋白的表达;RNA干扰在基因水平阻断JNK通路后,上调的CTGF表达受到明显抑制。此外,阻断JNK通路也能够抑制TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原蛋白表达。 结论RNA干扰能够有效的阻断JNK通路;JNK通路介导TGF-β1调控的CTGF表达。
背景 代谢综合征(metabolic syndrome,MS)是向心性肥胖、高血糖、高血压和血脂紊乱等多种因素在个体聚集的症候群。随着MS发病率的急剧升高,由MS导致的心血管并发症也明显增多。MS各组成成分都是心血管病的危险因素,这些与代谢有关的多种疾病或致病因素同时出现在一个个体身上,其临床预后不良的危险大于仅有一种危险因素患者,而且其效应不是简单相加,而是协同加剧,严重危害人类健康。

左室肥厚是心血管事件的一项重要的独立危险因素。随着代谢性危险因素的增加,如高血压合并糖尿病、肥胖或血脂紊乱等,则左室肥厚更加明显。既往对单纯高血压和糖尿病引起的心脏损害研究较多,而少有关于MS心肌重构及其分子机制的报道。本研究在建立MS大鼠模型的基础上,明确MS多种代谢异常因素共同作用对心肌重构的影响,阐明其机制,并寻找能延缓或逆转MS心肌重构的药物。 MS的主要病理生理基础是胰岛素抵抗。随着MS发病机制研究的进一步深入,炎症在胰岛素抵抗及MS中的作用越来越受到重视。炎性因子激活的一系列激酶可以使胰岛素作用底物(insulin receptor substrate,IRS)丝氨酸/苏氨酸磷酸化,阻碍其正常的酪氨酸磷酸化。目前研究较多的炎症导致胰岛素抵抗的三条途径为IKK/NF-κB、JNK及SOCS-3途径。既往研究显示,胰岛素和胰岛素受体结合后主要通过两条途径将信号下传至效应器:其中之一是经IRS/PI3K/Akt通路。当胰岛素与受体的α亚基结合并改变了β亚基的构型后,酪氨酸蛋白激酶被激活,将IRS上具有重要作用的十几个酪氨酸残基磷酸化,磷酸化的IRS结合并激活下游效应物,即P13K/Akt通路,最后参与细胞代谢、生存/凋亡、分化和增殖等过程。但目前,关于MS患者炎症影响心肌胰岛素信号传导的研究较为少见。 Tipifarnib小白鼠 黄连解毒汤(HLJDT)是清热解毒经典方剂,源于唐代王烹《外台秘要》,由黄连、黄岑、黄柏、桅子四味生药组成。研究表明,黄连解毒汤具有降糖、调脂、抗炎、改善胰岛素抵抗等作用,但黄连解毒汤对代谢综合征心肌重构的作用及机制研究较少。本研究旨在建立饮食诱导的MS大鼠模型,该模型具有人MS的许多相似特征。以此MS大鼠模型为研究对象,明确MS大鼠心脏结构和功能改变,探讨炎症导致MS心肌重构的可能机制,并研究黄连解毒汤对MS大鼠心肌重构的影响及其机制,从而为药物干预MS心肌重构,延缓心肌重构向心力衰竭的转化提供新思路。 目的 1.建立饮食诱导的MS大鼠模型。 2.观察MS大鼠模型心脏结构和功能的变化特点。 3.

3mL，10nM）膝关节腔内注射，每周1次，持续6周。通过Mankin·s评分及HE染色观察不同组别大鼠膝关节软骨组织形态学改变。

2.2免疫组织化学法及Western blot方法检测各组软骨组织中MMP-1，3，13的表达。 2.3WB方法检测各组软骨组织中P-p38、P-JNK、P-ERK1/2以及β-catenin的表达。 结果 1.体外实验 1.1不同浓度Icariin对SW1353细胞生存率的影响 MTT结果显示，0、5、10、20μM Icariin干预SW1353细胞，细胞生存率＞90%，对细胞生存无影响；40、80、100μM Icariin干预SW1353细胞，细胞生存率＜90%，对细胞生长有抑制作用。Icariin能显著下调IL-1β诱导的细胞MMP-1、3、13表达，且呈剂量依赖性。因此，在后续实验中，我们采用20μM作为Icariin干预浓度。 1.2Icariin对IL-1β诱导的SW1353细胞MMP-1、3、13mRNA和蛋白表达的影响 已经 SW1353细胞以20μM Icariin预处理1h，再加入10ng/mL IL-1β，收集细胞及上清液行q-PCR及ELISA检测。与IL-1β组相比，Icariin组MMP-1、3、13mRNA表达水平明显降低。ELISA结果显示，在细胞上清液中，与IL-1β组相比，Icariin组MMP-1、3、13的表达显著下降。

1.3Icariin对IL-1β诱导的SW1353细胞的P-p38、P-JNK、P-ERK1/2以及β-catenin表达的影响 可能 与正常组相比，IL-1β诱导后P-p38、P-JNK、P-ERK1/2以及β-catenin表达明显增加；与IL-1β组相比，Icariin作用后，P-p38、P-JNK、P-ERK1/2以及β-catenin表达明显下降。 1.4Icariin及通路抑制剂对MMP-1、3、13表达的影响 与IL-1β组相比，SB203580组P-p38、MMP-1、MMP-3、MMP-13表达含量明显下降，PD98059组P-ERK1/2、MMP-1、MMP-3及MMP-13表达水平下降，SP600125组P-p46、P-p54及MMP-13表达下调，XAV-939组β-catenin及MMP-13表达下调，Icariin组MMP-1、MMP-3、MMP-13、P-p38、 P-ERK1/2、P-p46、P-p54及β-catenin表达明显降低。分别与各通路抑制剂组相比，Icariin组P-p38、P-p46、P-ERK1/2、 P-p46及β-catenin表达较高，而MMP-1、3、13表达水平较低。 2.体内实验 2.1Icariin及各通路抑制剂对大鼠膝OA软骨组织结构的影响 正常组关节软骨表面光滑，各层细胞形状及排列整齐，潮线清晰。与正常组相比，模型组关节软骨Mankin·s评分升高，HE染色软骨层次破坏，软骨层变薄，软骨表层毛糙甚则溃疡形成。与模型组相比，其余各处理组软骨组织Mankin·s评分不同程度降低，软骨结构紊乱有明显改善，其中Icariin组Mankin·s评分降低最为显著，软骨结构破坏程度最轻。

2.2Icariin及各通路抑制剂对大鼠膝OA软骨组织MMP-1、3、13表达的影响 正常软骨组织中，MMP-1、3、13表达量较少；与正常组相比，模型组关节软骨组织MMP-1、3、13阳性表达增多，表达位置多位于软骨细胞胞质及细胞间质中。与模型组相比，SB203580组MMP-1、MMP-3、MMP-13阳性表达减少；PD98059组MMP-1、MMP-3及MMP-13阳性表达减少，SP600125与XAV-939组MMP-13表达减少。与通路抑制剂组相比，Icariin组MMP-1、3、13表达较少。 和 2.3Icariin对大鼠膝OA软骨组织P-p38、P-JNK、P-ERK1/2及β-catenin Icariin组与正常组相比，P-p38、P-p46、P-ERK1/2及β-catenin表达升高；与模型组相比，P-p38、P-p46、P-p54、P-ERK1/2及β-catenin降低；分别与各通路抑制剂组相比，除P-p54外，P-p38、P-p46、P-ERK1/2及β-catenin表达较高。 结论 1.浓度为20μM的Icariin对细胞生长无影响，可作为最佳浓度。 2. Icariin能下调IL-1β诱导的细胞MMP-1、3、13的表达。 3. Icariin能抑制IL-1β诱导的细胞P-p38、P-ERK、P-JNK及β-catenin的高表达。除P-p54，Icariin对信号通路关键因子的抑制效力不及相应的信号通路抑制剂，但对MMP-1、3、13的抑制力优于各信号通路抑制剂。 4. Icariin对Hulth法造模的大鼠膝OA模型的软骨组织Mankin·s评分及结构有明显的改善。 5. Icariin能下调大鼠膝骨关节炎模型软骨组织MMP-1、MMP-3、MMP-13、P-p38、P-ERK1/2、P-JNK及β-catenin的蛋白表达水平。 6. Icariin对p38、ERK、JNK及Wnt/β-catenin信号通路有一定程度的抑制作用。 7.

采用新生SD大鼠原代培养的心肌细胞,换用高纯度氮气饱和30 min的缺氧液,置于缺氧箱中,37℃密闭培养2 h后,再用正常培养基按常规培养条件培养30 min,造成复氧损伤。 2.非放射性PKC活性检测方法研究H/R心肌细胞中PKC活性的时效变化；Western-blot法检测心肌细胞PKCα、βⅡ、δ和ε蛋白表达及其转位的变化；检测H/R心肌细胞中Egr-1蛋白表达水平。

3.比色法测定细胞培养上清液中肌酸激酶(creatine kinase, CK)活性、双抗体夹心光化学测定法检测细胞培养上清液中心肌肌钙蛋白(cardiac PLX3397细胞系 troponin I, cTnI)的浓度,以反映心肌细胞损伤的程度；酶联免疫吸附法(enzyme-linked sandwich immunoassay, ELISA)测定细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)的含量,以反映心肌细胞炎症程度；Annexin V-FITC/PI双染法检测心肌细胞早期凋亡率,以反映H/R所致心肌细胞凋亡程度。 结果： 1.缺氧过程中,心肌细胞PKC活性升高,缺氧2 h时PKC活性显著增加,延长缺氧时间,PKC活性趋于下降；缺氧2 h时进行复氧,PKC活性维持不变,直至复氧120 minPKC活性恢复至正常水平。缺氧2 h复氧30 min时,PKC各亚型蛋白表达未发生变化,延长缺氧时间至4 h, PKCs蛋白表达明显下降,PKCα、βⅡ和6蛋白表达不变化。心肌细胞H/R可导致CK、cTnI浓度升高,TNF-α分泌增多,早期凋亡细胞增加。 Acadesine核磁共振 2.心肌细胞H/R可激活PKC各亚型：PKCα、βⅡ和ε分别由可溶性部分向颗粒性部分转位；PKCδ则由颗粒性部分向可溶性部分转位。F2可以抑制H/R所致PKCα的转位,而激活PKCε转位；对PKCβⅡ、δ转位不影响。同时,F2可以激活正常细胞PKCε发生转位；对正常细胞PKCα、βⅡ和6不影响；磷脂酶C (phospholipase C, PLC)抑制剂U73122可拮抗F2对正常细胞和H/R PKCε激活的作用。 3.cPKC特异性抑制剂Go6976,可下调Egr-1蛋白高表达,减少CK、cTnI泄漏和TNF-α的分泌,降低早期凋亡细胞检出率。PKCs亚型特异性抑制剂εV1-2,可增加CK、cTnI漏出,加快细胞早期凋亡进程,但对TNF-α的分泌和Egr-1蛋白高表达没有影响。

4.F2可以明显改善H/R所致心肌细胞的损伤。PKC激动剂thymeleatoxin (TXA)可抑制F2对Egr-1蛋白高表达的下调,拮抗F2的心肌保护作用；PKCε特异性抑制剂εV1-2可拮抗F2对H/R损伤的改善作用,但对Egr-1蛋白的高表达没有影响。 结论： 1.心肌细胞H/R可引起PKC各亚型活性的变化,但其转位的部位及时间不一致;PKCα的转位可增加Egr-1蛋白表达。 2.心肌细胞H/R过程中PKC各亚型活性的变化与H/R所致损伤有关,其中PKCα转位可加重细胞损伤与凋亡,而PKCε转位则减轻上述损伤。 3.F2抑制钙依赖PKCα转位和激活非钙依赖PKCε转位可能是其抗H/R损伤的重要机制。
神经内分泌与免疫功能的相互渗透作用和关联作用,对机体在不同条件下稳态的维持起有决定性的作用,尤其在创伤与感染的病理生理条件下。神经内分泌与免疫系统之间相互关系的研究已经成为神经免疫内分泌学(Neuroimmun-endocrinology)的一个重要研究热点。研究发现,下丘脑分泌的神经肽可参与外周免疫功能的调节机制,如促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin-releasing

AMN-107 价格 hormone,CRH)及其结构相关肽urocortin(UCN)经过下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamicpituitary-adrenal,HPA)轴发挥间接地免疫/炎症调节作用,但是外周局部的CRH与UCN可以自分泌或旁分泌的方式直接参与免疫/炎症的调节。严重创伤或感染后机体免疫功能出现失调,尤其是巨噬细胞免疫功能改变可导致机体防御感染的免疫功能紊乱,导致全身性炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)、多器官功能衰竭(multiple organ failure,MOF)的易感性增加。巨噬细胞功能紊乱的机制很复杂,可能与微环境中神经内分泌激素等有关。因此,深入探讨神经肽CRH与UCN对细胞免疫功能影响及机制有利于维持机体内环境的稳态,丰富创伤或感染后免疫功能紊乱的免疫平衡调控策略。CRH与UCN,以及它们的受体在机体中枢神经系统与外周组织与器官分布非常广泛。CRH与UCN通过与其受体结合,激活多种G蛋白,从而可能激活下游多种信号通路,发挥不同的生物学效应。目前关于CRH在调节机体行为、内分泌、自律性以及应激免疫等方面的研究已积累了很多资料。越来越多的证据表明外周CRH与UCN在调节免疫炎症反应过程发挥着重要的作用。吞噬清除作用作为巨噬细胞重要的天然免疫功能,在机体严重创伤后感染后往往受到抑制。尽管对巨噬细胞吞噬机制已有广泛的认识,但是关于CRH与UCN,在巨噬细胞天然吞噬功能中的调节作用,目前知之甚少。 本研究通过采用原代培养大鼠腹腔巨噬细胞,观察CRH与UCN对巨噬细胞吞噬荧光微球的吞噬率以及平均荧光强度的影响、及其对巨噬细胞在吞噬过程中细胞骨架蛋白重塑与解聚的动态影响,明确CRH与UCN对巨噬细胞天然吞噬功能的调节作用。接着深入研究CRH与UCN调控巨噬细胞骨架蛋白调节因子Rho GTPases亚家族蛋白RhoA、Rac1磷酸化的量效关系和时效关系,进而利用信号分子阻断策略探讨CRH与UCN调控巨噬细胞RhoA、Rac1磷酸化的受体途径和信号转导通路,旨在揭示CRH与UCN调控巨噬细胞天然吞噬功能的信号转导机制。 主要研究内容与结果: 1.

0统计软件进行统计分析。实验所测得数据进行正态性检验和方差齐性检验,以“均数±标准差”表示。发病率用用卡方检捡进行统计学分析,以百分比表示。多组计量资料均数的比较：方差齐时应用ONE-WAY-ANOVA中SNK-q检验进行方差分析,方差不齐时立用非参数秩和检验。以P
研究背景：骨肉瘤(Osteosarcoma)源于间叶组织,是以能产生骨样组织的梭形基质细胞为特征的恶性肿瘤,是原发性恶性骨肿瘤中最常见、恶性程度最高的一类骨肿瘤,好发于儿童和青少年期。在手术切除的基础上辅助阿霉素(Adriamycin, 那个 ADR)药物为主的联合化疗是目前临床主要治疗手段。尽管新型辅助化疗的应用极大地提高了骨肉瘤患者的5年存活率,但是骨肉瘤患者的预后一直很差,长期生存率仍徘徊不前。骨肉瘤易复发、易转移及患者对包括阿霉素在内的化疗药物产生原发或继发性耐药是目前导致临床化疗失败的主要原因。根据肿瘤干细胞理论,骨肉瘤肿瘤干细胞具有自我更新、强致瘤性、多向分化潜能、产生异质性肿瘤细胞及多重耐药性的生物学特征,因此骨肉瘤肿瘤干细胞的存在可能是临床化疗失败的关键原因之一。如果可以特异性的针对骨肉瘤肿瘤干细胞,尤其是化疗作用下骨肉瘤肿瘤干细胞相关特性的改变,可为深入认识骨肉瘤的发生发展提供新方向,并以此为基础寻找和发现靶向骨肉瘤肿瘤干细胞的药物,对于骨肉瘤的最终治愈具有不可估量的前景和价值。本论文通过考察一线化疗药物阿霉素对骨肉瘤肿瘤干细胞特性和转移能力的影响,发现人类Kruppel样因子4(K1f-4)是促进骨肉瘤肿瘤干细胞特性和转移能力的重要调控因子,进一步通过研究其调控骨肉瘤肿瘤干细胞特性和转移能力的作用及其分子机制,进而揭示调控骨肉瘤发生发展、转移和耐药等特性的新的关键因子；最后以Klf-4蛋白为潜在靶点筛选到以辛伐他汀为代表的他汀类药物能够抑制Klf-4蛋白,进而有效地拮抗了阿霉素促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性和转移能力作用,为骨肉瘤的靶向治疗策略提供全新的思路。第一部分：阿霉素影响骨肉瘤细胞的干细胞特性及肿瘤转移能力的作用及机制研究一.研究目的：虽然包括辅助化疗和新辅助化疗在内的化疗方案的引入极大地提高了骨肉瘤患者的5年生存率,但是骨肉瘤患者的预后一直很差,长期生存率一直徘徊不前。骨肉瘤易复发、易转移及患者对包括阿霉素在内的化疗药物产生原发或继发性耐药是目前导致临床化疗失败的主要原因。根据肿瘤干细胞理论,骨肉瘤肿瘤干细胞的存在可能是其化疗失败的关键因素,目前针对骨肉瘤化疗与肿瘤干细胞具体关系尚未见报道。本课题旨在研究骨肉瘤一线化疗药物阿霉素(Adriamycin,

ADR)与骨肉瘤肿瘤干细胞特性及肿瘤转移能力的关系,阐明其作用机制,为临床靶向治疗骨肉瘤提供潜在靶点。二.研究方法：SRB法检测骨肉瘤细胞对药物的敏感性；siRNA干扰手段沉默目标蛋白；Western Blotting检测蛋白表达、qRT-PCR检测基因表达；流式细胞术检测干细胞标记物CD133的表达；肿瘤微球形成实验考察细胞的自我更新能力；细胞划痕修复和Transwell小室模型考察细胞迁移运动能力。三.研究结果：1.ADR对骨肉瘤肿瘤干细胞特性的影响：1)ADR可抑制骨肉瘤细胞的增殖能力且呈良好的剂量关系和时间关系；2)ADR能够引起KHOS/NP、U2OS和OS20三株骨肉瘤细胞的干细胞标记物CD133阳性表达率增加；3)ADR处理组的骨肉瘤细胞形成sphere的数目明显高于对照组；4)ADR作用能够显著提高骨肉瘤肿瘤干细胞标记物CD GDC-0449 花费 133、ALDHA1和ABCG2的转录水平。2.ADR对骨肉瘤细胞转移能力的影响：1)ADR处理组的骨肉瘤细胞划痕修复能力显著高于对照组；2)ADR处理组的骨肉瘤细胞迁移至Transwell下室的细胞数目显著高于对照组。3.ADR对干细胞转录因子的影响：1)ADR作用骨肉瘤细胞后能够选择地激活Klf-4的mRNA转录；2)ADR作用骨肉瘤细胞后能够上调Klf-4蛋白表达水平。4.Klf-4对ADR促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性的影响：1)沉默Klf-4能够明显抑制ADR引起的CD133表达增加；2)沉默Klf-4能够明显减少ADR所引起sphere数目增加；3)沉默Klf-4能够明显减少A_DR促进的肿瘤干细胞标记物CD133、

ALDHA1和ABCG2的mRNA表达。5.KIf-4对ADR促进的骨肉瘤细胞转移能力的影响：1)沉默Klf-4能够抑制ADR引起的骨肉瘤细胞划痕修复能力增强；2)沉默Klf-4能够明显减弱ADR引起的骨肉瘤细胞迁移运动能力增强。四.研究结论：本研究首次发现一线化疗药物ADR能够增强骨肉瘤细胞的肿瘤干细胞特性及肿瘤转移能力,且这种作用依赖于Klf-4的蛋白水平的上调。本研究从肿瘤干细胞角度为解释患者在接受阿霉素治疗的过程中出现骨肉瘤的复发和转移现象提供了新视角。第二部分Klf-4调控骨肉瘤肿瘤干细胞特性及转移能力的作用研究一.研究目的：人类Kruppel样因子4(Klf-4)是Spl/Kruppel样锌指转录因子家族的成员之一,参与调控细胞增殖、分化、胚胎发育等重要生命过程。与已知的TGF-β一样,Klf-4在不同的遗传背景的细胞中具有癌基因或者抑癌基因的不同功能,而Klf-4对骨肉瘤的调控作用尚未见任何文献报道。第一部分研究显示Klf-4参与调控ADR对骨肉瘤肿瘤干细胞特性和转移能力的影响,提示Klf-4可能可以作为靶向骨肉瘤肿瘤干细胞的潜在靶点,本课题将进一步研究Klf-4在骨肉瘤中的表达水平与其自身恶性程度的可能关系以及其在骨肉瘤干细胞样模型中的表达,并以此为切入点,较为全面地阐明其与骨肉瘤肿瘤干细胞特性和转移能力的相互关系,从而揭示调控骨肉瘤发生发展、转移和耐药的关键因子,为骨肉瘤的治疗提供新的潜在分子靶点,有望进一步推动骨肉瘤的临床治疗。二.研究方法：慢病毒转染细胞构建目的基因过表达模型,siRNA干扰手段沉默目标蛋白；肿瘤微球形成实验检测细胞的自我更新能力；Western 并且 Blotting检测蛋白表达、qRT-PCR检测基因表达；细胞划痕修复和Transwell小室模型考察细胞迁移运动能力；台盼蓝拒染法结合血细胞板计数描绘细胞生长曲线；SRB法检测药物对细胞的增殖抑制能力,PI染色结合流式分析检测细胞周期分布以及药物诱导细胞发生凋亡能力；软琼脂糖克隆形成实验检测细胞克隆形成能力；裸小鼠移植瘤实验检测细胞成瘤能力。三.研究结果：1.Klf-4在不同骨肉瘤细胞中的表达情况：1)Klf-4在骨肉瘤原代样本OS21细胞中的表达水平高于原代样本OS15和OS20细胞；2)Klf-4蛋白在骨肉瘤细胞系KHOS/NP中的表达明显高于U20S和MG63细胞；3)Klf-4蛋白在骨肉瘤细胞形成的sphere干细胞球中的表达高于相应贴壁培养的正常细胞。2.

05）；与AUR0h比较，AUR6h组的表达最低（P＜0.05），AUR解除梗阻6h后，HSP27的表达逐渐恢复。 此网站 5、急性梗阻解除后6h，三种磷酸化的HSP27蛋白含量最低（与AUR0h组比较，P＜0.05），而急性梗阻解除6h后三种磷酸化HSP27蛋白的表达逐渐升高。 6、成功构建了能高表达及干扰HSP27的慢病毒载体质粒，感染膀胱平滑肌细胞后并能高效、特异的促进和抑制HSP27的表达。 7、与正常膀胱平滑肌细胞构建的人造肌条相比，HSP27过表达组的人造肌条收缩力增大（p＜0.05）；HSP27干扰组的人造肌条收缩力降低（p＜0.05）。 结论 1、AUR后大鼠膀胱的组织结构出现损害，膀胱逼尿肌细胞的超微结构也有一定程度的损害，并都具有一定的时相特异性，其特点是：在AUR解除梗阻后6h内，膀胱组织结构、逼尿肌超微结构受损逐渐加重，而后逐渐恢复。 2、AUR后大鼠膀胱逼尿肌收缩功能受损，且具有时相特异性，即在AUR解除梗阻后6h内，膀胱的收缩力逐渐降低，而后膀胱收缩功能逐渐恢复。

3、AUR后大鼠膀胱逼尿肌HSP27的表达变化趋势与AUR后大鼠膀胱收缩功能的变化趋势一致，并具有相关性。AUR后膀胱HSP27的高表达对膀胱逼尿肌细胞有保护作用。 4、成功构建了能高表达及干扰HSP27的慢病毒载体质粒，感染膀胱平滑肌细胞后并能高效、特异的促进和抑制HSP27的表达。 5、成功构建了膀胱平滑肌细胞的人造肌条，在KCl诱导的收缩研究中发现HSP27的表达水平与膀胱平滑肌的收缩密切相关。
T-2毒素由镰刀菌(Fusarium)产生,是单端孢霉烯族毒素类中毒性最强的毒素。粮食作物,尤其小麦、大麦、燕麦和玉米是T-2毒素主要的污染对象。通过污染饲料,T-2毒素对动物和动物性食品消费者健康造成危害。T-2毒素与核糖体结合或破坏线粒体功能来抑制细胞的蛋白质和核酸的合成,通过激活MAPK、JAK/STAT等信号转导通路,导致炎性细胞因子的表达,诱导细胞凋亡和坏死。 NLG919分子量 T-2毒素的代谢途径与毒性产生密切相关。T-2毒素进入动物体内被代谢成各种产物,其毒性差异变化巨大。HT-2毒素、3’-OH-T-2毒素和Neosolaniol(NEO)等是T-2毒素在动物体内的主要代谢产物。与T-2毒素相比,一些代谢产物毒性降低,但有些代谢物的毒性升高。研究清楚T-2毒素的代谢途径和主要代谢产物是揭示其在动物体内如何发挥毒性的重要前提。所以,揭示T-2毒素在动物中,尤其是食品动物中的代谢途径,对毒性机理研究的开展和食品安全以及人类健康等方面至关重要。然而,迄今为止,人们尚未清楚T-2毒素在食品动物中的整体代谢特点,尤其是不同种属动物对T-2毒素代谢转化存在着何种异同,尚无系统研究。 T-2毒素引起核糖体和线粒体的损伤并最终导致细胞凋亡与T-2毒素迅速激活MAPK信号通路密切相关。MAPK被证明是单端孢霉烯族毒素发挥细胞毒性的重要信号通路之一。MAPK的激活迅速而短暂,但与细胞凋亡密切相关的炎性细胞因子,如IL-6、TNF-α和IL-1β等的激活却是持续而缓慢的,所以MAPK通路下游很可能存在其它信号通路激活炎性因子。本实验室前期工作已经初步发现JAK/STAT是单端孢霉烯族毒素的下游信号通路之一,并与毒素的免疫毒性密切相关。然而,目前与T-2毒素毒性密切相关的MAPK和JAK/STAT信号通路的上下游关系仍是未知,两者的激活场所在哪里?哪些因子连接两者的传递?尚未有报道。

已有研究表明肝脏和肠道是代谢单端孢霉烯族毒素的主要场所。所以,本课题系统研究了T-2毒素在猪、鸡、鱼和大鼠肝微粒体、肝胞液以及肝细胞中的代谢情况。包括分析鉴定主要的代谢产物,讨论主要的代谢途径以及种属间代谢的异同。此外,为进一步完善T-2毒素在动物体内的代谢,本文以猪为例探讨了T-2毒素在猪盲肠道模型中的代谢和降解情况,从而与肝脏的代谢相呼应。在毒性机理研究上,本研究着重从T-2毒素作用后MAPK和JAK/STAT信号通路的相互交联转导关系,以及某些重要基因和蛋白的功能去揭示T-2毒素细胞毒性的潜在毒性机理。为此,本研究通过信号通路特异性抑制剂、免疫荧光/激光共聚焦和透射电镜等方法和手段研究了MAPK和JAK/STAT信号通路的交联转导关系,毒素的胞内毒性靶标,并深入探讨了JNK1和STAT3交联关系和功能。本研究对于寻找毒素的毒性化合物和残留标示物提供了重要的靶标信息,对阐释动物对毒素的耐受性机理、毒素的防控和人类以及动物疾病的预防有重要意义。毒作用信号转导研究也对深入认识T-2毒素的毒理机制以及信号在胞内外传递并行使功能研究有重要参考价值。

所以 1.T-2毒素在动物肝脏中比较代谢研究 本研究首先制备了猪、鸡、大鼠、鲤和草鱼肝微粒体、肝胞液和肝细胞,加入NADPH生产系统,在37℃(鱼28℃)下与T-2毒素孵育2h后,样品经过沉淀蛋白、高速离心和过滤膜等前处理过程,采用HPLC-MS-IT-TOF检测鉴定代谢物,探讨T-2毒素在动物肝脏中的代谢途径,比较T-2毒素在不同动物种属间代谢的异同。 结果表明,T-2毒素在肝微粒体中主要被代谢成5种产物(MT1-5),分别为HT-2毒素(MT1、Neosolaniol (NEO)(MT2)、3′-OH-T-2毒素(MT3)、3′-OH-HT-2毒素(MT4)和T-2triol (MT5),同时还发现T-2毒素原形。在猪和鸡中发现HT-2毒素(MT1). NEO(MT2)、3′-OH-T-2毒素(MT3)和3′-OH-HT-2毒素(MT4)。大鼠肝微粒体中除发现上述4种代谢物外,还检测到T-2triol,证明大鼠肝脏代谢T-2毒素能力强于其他动物。与陆地动物显著不同,水生动物鲤肝微粒体中只检测到HT-2毒素、NEO、3′-OH-T-2毒素和微量3′-OH-HT-2毒素代谢物。草鱼中检测到3’-OH-T-2和3′-OH-HT-2毒素,但并未检测到HT-2毒素。3’-OH-T-2毒素和NEO是鱼类的主要代谢产物。陆地动物(猪、鸡和大鼠)生成HT-2毒素的相对含量比鱼类显著高p<0.

94(95%CI:0.88~0.96),敏感性为93.0%,特异性为86.0%。结论 ELF试验是有效诊断慢性丙肝患者肝纤维化的无创性检查方法,能够准确的诊断肝纤维化分期和肝硬化。
受体相互作用蛋白2(receptor-interacting protein 2,RIP2)属于RIP家族成员,在多种组织中均有分布。RIP2可与多种蛋白相互作用,参与多个受体的信号转导,发挥生理功能,被认为是固有免疫、适应性免疫、凋亡信号途径的重要衔接分子。基于其特殊的分子结构及生物学功能,RIP2在炎症、肿瘤、自身免疫病等多种疾病中发挥着重要作用。本文就RIP2的结构、生物学功能以及其在相关疾病特别是口腔疾病发生发展中所起作用作一综述。
AIM: MAPK抑制剂 To investigate the role of sorafenib(SFN) in autophagy of hepatocellular carcinoma(HCC). We evaluated how SFN affects autophagy signaling pathway in human HCC

cell lines. METHODS: Two different human HCC cell lines, Hep3 B and Huh7, were subjected to different concentrations of SFN. Cell viability and onset of apoptosis were determined with colorimetric assay and immunoblotting analysis, respectively. The changes in autophagy-related proteins, including LC3, ULK1, AMPK, and LKB, were determined with immunoblotting analysis in the presence or absence of SFN. To assess autophagic dynamics, autophagic flux was measured with chloroquine, a lysosomal inhibitor. Epothilone B The autophagic responsiveness between different HCC cell lines was compared under the autophagy enhancing conditions.RESULTS: Hep3 B cells were significantly more resistant to SFN than Huh7 cells.

Immunoblotting analysis revealed a marked increase in SFN-mediated autophagy flux in Huh7 cells, which was, however, absent in Hep3 B cells. While both starvation and rapamycin enhanced autophagy in Huh7 cells, only rapamycin increased autophagy in Hep3 B cells. Immunoblotting analysis of autophagy initiation proteins showed that SFN substantially increased 以及 phosphorylation of AMPK and consequently autophagy in Huh7, but not in Hep3 B cells.CONCLUSION: The autophagic responsiveness to SFN is distinct between Hep3 B and Huh7 cells. Resistance of Hep3 B cells to SFN may be associated with

altered autophagy signaling pathways.
目的探讨姜黄素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages,PMs)分泌炎症因子的影响。方法分离、培养腹腔巨噬细胞,用不同浓度姜黄素(12.5、25、50 mg/L)预处理细胞12 h,进而使用100ng/ml LPS刺激细胞,12 h后收集培养基上清液,ELISA检测促炎介质肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素6(interleukin-6,IL-6)的含量;30 min后收集细胞裂解物,Western blot检测p38 MAPK激酶活性。结果未经处理的腹腔巨噬细胞经LPS刺激12 h后,上清中TNF-α、IL-6的表达水平显著上升(p0.05);而50、25 mg/L姜黄素可以明显抑制LPS诱导的TNF-α、IL-6的表达(p
神经变性疾病是由于神经元或者髓鞘的损伤、丢失引起的神经系统疾病,其病因复杂,影响因素甚多,发病机制尚不完全明确。蛋白激酶在神经变性疾病的发生发展过程中发挥着重要的作用。然而,蛋白激酶抑制剂能有效保护神经细胞,缓解或减轻神经变性疾病的病情。本文就阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病等神经变性疾病中所涉及的蛋白激酶及其抑制剂进行综述,分析各蛋白激酶与主要神经变性疾病疾病之间的相互关系,为针对这些疾病的药物研发提供新的思路和策略,认为新型复方药物可能成为治疗神经变性疾病药物研发的方向。
目的探讨番荔枝内酯Bullatacin诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法采用MTT法检测不同浓度(6.25、12.

7%(23/30)、80.0%(8/10)、53.3%(8/15)、92.0%(23/25)。 446例血浆样本EGFR基因突变和其临床特征的关联性显示：女性的突变率高于男性，腺癌的突变率高于非腺癌者，但是两者无统计学意义(P=0.148,P=0.262)。 2.初治NSCLC患者肺原发灶EGFR基因突变状态与其临床病理特征的相关性研究 253例初治NSCLC患者的EGFR基因突变检测结果中主要有以下4种类型19Del、21L861Q、21L858R、20Ins即外显子19号上的缺失突变、外显子21号的替代突变以及点突变、外显子20号上的插入突变。109例是突变型，144例是野生型，各自的比例为43.1%(109/253)，56.9%(144/253)。 敏感型EGFR基因突变在初次就诊的253例NSCLC患者中的发生率为42.%(107/253)，其中EGFR基因(21L861Q)21外显子替代突变发生率与和(21L858R)21外显子点突变发生率为39.1%(32/107)、19外显子缺失突变发生率为70.1%(75/107)。(20Ins)20外显子插入突变为TKIs耐药性突变，其突变发生率为0.8%(2/253)。肺原发灶EGFR基因敏感型突变中男性与女性突变率之比为25.8%(41/61) CHIR-258 vs70.2%(66/94)；有吸烟史与无吸烟史者突变率之比为18.1%(19/105) vs60.9%(81/133)；非腺癌与腺癌者突变率之比为8.5%(4/47)vs50.0%(103/206)，两者有统计学意义(P<0.05%）。比较细胞A549与HCC827细胞的侵袭能力强弱，我们采用Transwell方法发现前者弱于后者（P
目的：

肺癌是全世界癌症相关死亡的最主要原因，每年以超过20万新病例的速度增长，呈现出非常高的发病率和死亡率。在中国，肺癌也已经取代肝癌成为恶性肿瘤死亡的首要原因。目前，绝大多数的肺癌在确诊时已经是晚期且无法治愈，现有的治疗措施均表现出较差的预后。因此，寻找新的肺癌早期诊断标志物和治疗靶标对于肺癌的预防、早期诊断、治疗及预后具有极为重要的临床意义。 DNA甲基化是一种表观遗传的调控方式，它能通过引起染色质的结构、DNA的稳定性、DNA的构象及转录因子与其相应基因的相互作用来实现对基因调控的目的。在正常细胞中，原癌基因去甲基化可引起该基因的异常上调表达并促进癌变；而抑癌基因的甲基化则会引起相应基因的沉默或者表达缺失，这些都会导致抑癌基因的失活，引起肿瘤生长。由于基因DNA的甲基化状态改变是先于其表达水平的变化的，因此相关基因的DNA甲基化状态有望成为一个癌症早期诊断的标志物。

KRX-0401细胞系 NF-κB家族具有调节细胞增殖、炎症、侵袭、迁移等多种功能，所以其信号通路的精细有序调控对维持包括细胞生长、免疫应答、炎症反应和细胞清除等多种正常生理过程十分重要。最近认为该通路的异常是癌症发生发展的重要原因之一。 在对NF-κB家族成员NF-κB2基因组区域进行生物信息学分析后，我们发现在其启动子区域有一CpG岛，提示该基因的转录可能受到甲基化修饰的影响。此外，我们还发现在该基因的第11和第12外显子之间内含子区域还存在一段富含57个CpG位点的岛，经过前期的荧光报告基因试验证实，此区域对该基因行使一定的增强子功能。为此我们对Brunner最近报道的全基因组Methyl-Seq结果进行了分析，NF-κB2基因CpG岛在不同细胞内存在甲基化状态差异。与单纯的CpG岛相比，这种差异甲基化区域更强烈地提示其附近基因受到甲基化调控的影响。本研究，希望通检测NF-κB2在癌细胞中表达是否有差异及其甲基化状态，来初步探讨NF-κB2甲基化状态成为肺癌治疗靶标的可能性。 方法： 1.采用实时荧光定量PCR方法分别对人正常支气管上皮细胞株HBE、小细胞肺癌细胞株NCI-H446、肺腺癌细胞株A549和肺鳞癌细胞株SK-MES-1中NF-κB2基因的mRNA表达情况进行检测，以确定NF-κB2表达是否有差异。 2.采用Western Blot技术检测NF-κB2前体蛋白p100的表达情况，从蛋白水平确定其表达差异。 3.对UCSC数据库进行挖掘，确定NF-κB2两个区域的CpG岛，设计扩增产物介于250~400bp的引物以便于随后对该基因进行甲基化测序。 4.采用BSP方法分别检测肺癌细胞和正常支气管细胞中甲基化状态。 结果： 1.

NCI-H446、A549和SK-MES-1中NF-κB2mRNA较在HBE中表达更高。 2. p100蛋白在3种肺癌细胞中较HBE细胞均上调表达。 3.经过重亚硫酸氢钠修饰后测序表明，4种细胞株中NF-κB2两个区域所扩增片段的CpG位点均呈非甲基化状态。 已经 结论： 1. NF-κB2mRNA和蛋白水平在3种肺癌细胞中均显著升高，提示NF-κB2在肺癌的发生发展起着重要作用。 2.在肺癌细胞和正常支气管细胞中NF-κB2基因的两个区域CpG到均未呈现出差异甲基化，提示甲基化修饰未直接参与该基因的表达调控，可能存在其他相关的表观遗传学调控机制，有待进一步的探索。
研究背景： 肺癌为发病率和死亡率第一的恶性肿瘤。非小细胞肺癌（non-small celllung cancer，NSCLC）占到80-85%，其中70%以上的患者确诊时已属晚期（IIIB-IV期），预后差，只能接受内科治疗，如化疗、靶向治疗等。虽然经过多年努力，但是NSCLC总的治疗效果仍不乐观。传统治疗策略如化疗主要根据患者的相同临床特征制定，如病理类型、分期，缺乏深层次意义上个体化治疗方法的思考，并未给NSCLC患者的预后带来实质性的改变，其客观缓解率仅为30%左右，中位生存期仅为8-10个月，1年生存率30%左右[1]。近年来随着肿瘤基因组学和蛋白质组学的深入研究发现，不同NSCLC患者间某些基因的碱基差异或表达差异与疾病发生、发展及治疗、预后之间存在密切相关性。研究显示，EGFR、KRAS、ERCC1、RRM1四种基因的碱基突变或表达状态是指导NSCLC患者个体化治疗方案的重要的潜在依据，并且，经过上述四种特定的分子生物标志物筛选的NSCLC患者群对靶向药物或化疗药物的有效率显著高于非筛选患者群[2-5]。因此，为评估上述四种基因不同突变或表达状态是否可作为分子标志物预测我国西南地区晚期NSCLC患者接受靶向治疗或化疗的疗效，我们开展此项研究。 目的： 本研究拟在检测我国西南地区晚期NSCLC患者EGFR、KRAS、ERCC1、RRM1四个基因突变或表达状态基础上，制定患者个体化治疗策略，并评估其在改善患者症状和提高生存时间等方面的临床应用价值。 方法： 1.回顾性分析我院呼吸内科2011年1月1日至2012年12月31日收治的239例（患者均未行基因检测）晚期NSCLC接受三种不同第三代化疗药联合铂类化疗的疗效，疗效指标包括ORR、DCR和PFS等。 2.