01）。高脂饮食糖尿病组大鼠给予2%STZ腹腔注射后出现精神萎靡，毛色发黄，无光泽，饮水量、尿量较给药前明显增加。腹腔注射第七天，糖尿病组大鼠体重明显下降，血糖明显高于正常组（P<0.01），其中D-I／R组比N-I／R组AI升高更明显（P<0.01）。N-P、D-P与相应I／R组相比AI降低（P<0.01），其中N-P比D-P组下降更明显（P<0.01）。给予Wortmanmin再灌注后N-W组、D-W组AI与相应I／R组无显著差别，而与相应P组有显著差别（P<0.01）。其中D-I／R组比N-I／R组caspase-3、Bax、细胞色素C表达增多，Bcl-2表达减少更明显（P<0.01）。N-P组、D-P组与相应I／R组相比caspase-3、Bax、细胞色素C表达减少，Bcl-2表达增多（P<0.01），其中N-P组比D-P组caspase-3、Bax、细胞色素C表达减少，Bcl-2表达增多更明显（P<0.01）。预先给予Wortmanmin再灌注后，N-W组、D-W组各凋亡蛋白的表达与I／R组无显著差别，而与相应P组有显著差别（P
研究目的：

1.研究七氟醚预处理是否有延迟性心肌保护作用； 2.探讨线粒体ATP敏感性钾通道(mito-KATP)和线粒体通透性转换孔(MPTP)在七氟醚预处理的延迟性心肌保护作用中角色； 3.观察七氟醚预处理24小时后对大鼠心肌线粒体蛋白质组的影响； 4.电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氧酶(NADH-DH)在七氟醚预处理后的表达改变。 研究方法研究分为四部分： 1.七氟醚预处理是否有延迟相的减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用。健康雄性SD大鼠随机分为4组(n=12)：假手术组(SHAM组)、缺血再灌注组(IR组)、七氟醚预处理后24h组(SEVO-24H组)和七氟醚预处理后48h组(SEVO-48H组)。SHAM组大鼠开胸后左冠状动脉前降支(LAD)只套线,不结扎；IR组大鼠LAD结扎阻断30min后再灌注120min；SEVO-24H组大鼠吸入2.5%七氟醚60min,24h后建立心肌缺血再灌注模型；SEVO-48H组大鼠吸入2.5%七氟醚60min,48h后建立心肌缺血再灌注模型。每组6只大鼠分别记录各组缺血前(T0)、缺血30min(T1)、再灌注30min(T2)、再灌注60min(T3)和再灌注120min(T4)时刻心率(HR)、平均动脉压(MAP)并计算心率收缩压乘积(RPP);再灌注结束后取颈内动脉血测定肌钙蛋白(cTnl),然后处死动物,伊文氏蓝和TTC染色法测心肌梗死面积。每组另6只动物于再灌注结束时电镜下观察各组心肌超微结构,并取心脏左室检测心肌ATP含量和分离线粒体检测线粒体呼吸控制率(RCR)；检测心肌丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性；免疫印记法检测心肌胞浆内细胞色素C(Cyto 没有 C)含量,以及心肌Bcl-2和Bax蛋白表达,分离心肌线粒体观察线粒体在200μM[Ca2+]环境下A520改变(提示线粒体肿胀程度),来判断MPTP通透性改变。2.Mito-KATI和MPTP在七氟醚预处理的延迟性心肌保护作用中角色。健康雄性SD大鼠随机分为11组(n=6)。假手术组(SHAM组)、缺血再灌注组(IR组)、七氟醚预处理组(SEVO组)、5-羟基癸酸(触发)+七氟醚预处理组[5-HD(T)+SEVO组]、5-羟基癸酸(触发)组[5-HD(T)组]、七氟醚预处理组+5-羟基癸酸(调节)+[SEVO+5-HD(M)组]、5-羟基癸酸(调节)组[5-HD(M)组]、苍术苷(触发)+七氟醚预处理组[ATR(T)+SEVO组]、苍术苷(触发)组[ATR(T)组]、七氟醚预处理+苍术苷(调节)组[SEVO+ATR(M)组]、苍术苷(调节)组[ATR(M)组]。SHAM组开胸不建立心肌缺血再灌注模型,IR组采取结扎LAD30min后再灌注120min建立在体心肌缺血.再灌注模型,SEVO组在建立心肌缺血再灌注模型前给予2.5%七氟醚吸入共60min。5-HD(T)+SEVO组、5-HD(T)组、ATR(T)+SEVO组组和ATR(T)组分别于七氟醚(氧气)吸入前10min给予5-HD(5mg/kg)或者ATR(5mg/kg)；SEVO+5-HD(M)组、5-HD(M)组.、SEVO+ATR

ATM激酶抑制剂溶解度 (M)组和ATR(M)组于LAD结扎前15min给予5-HD或者ATR。记录缺血再灌注过程中血流动力学指标HR、MAP和计算RPP,再灌注结束时比较各组心肌梗死面积和血清肌钙蛋白(cTnl)水平,电子显微镜下观察心肌超微结构。 3.观察2.5%七氟醚预处理2/4小时后对大鼠心肌线粒体蛋白质组的影响。健康雄性SD大鼠随机分为3组(n=6)。假手术组(SHAM组)、缺血再灌注组(IR组)和2.5%七氟醚预处理组(SEVO组)。IR组大鼠采取结扎LAD30min后再灌注120min建立心肌缺血再灌注模型,SEVO组大鼠吸入2.5%七氟醚(共60min)2/4h后建立心肌缺血再灌注模型,SHAM组.不建立工R模型。于再灌注120min后取心肌左室,采用差速离心结合密度梯度分离线粒体,双向凝胶电泳法(2-DE)分离线粒体蛋白质,分析凝胶图像后找出差异蛋白,并用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异蛋白,并用免疫印记法验证其中的两个蛋白电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADH-DH)。

寻找更多 4.电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADH-DH)在七氟醚预处理后表达变化。健康雄性SD大鼠随机分为7组(n=12)。假手术组(SHAM组)、缺血再灌注组(IR组)、七氟醚预处理组(SEVO组)、mitoKATP|沮断剂5-HD(5mg/kg)+七氟醚预处理组(5-HD+SEV0组)、活性氧清除剂2-MPG (20mg/kg)+七氟醚预处理组(MPG+SEVO组)、单独5-HD组和MPG组。5-HD组和2-MPG组均在七氟醚(或者氧气)吸入前10min静脉给予,每组6只大鼠于七氟醚(或氧气)预处理后/4h采用RT-PCR检测心肌VDAC1和NADH-DH的mRNA表达。除SHAM组外,其它各组大鼠于24h后采用结扎LAD的方法建立在体缺血再灌注模型,缺血30min后再灌注120min。再灌注120结束时检测心肌梗死面积和血清cTnI,电镜下观察心肌超微结构,Western blot法检测心肌VDAC1和NADH-DH,以及Bcl-2和Bax表达。 研究结果： 1.除SHAM组外,其它各组大鼠心肌缺血再灌注过程中HR、MAP和RPP均下降,但是各时间点组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与SHAM组比较,IR组心肌缺血再灌注后显示明显的心肌梗死面积和心肌cTnI释放(P<0.05)。而七氟醚预处理后24h和48h均能够减少缺血再灌注后心肌梗死而积和cTnI释放,电镜下观察心肌损伤亦减轻(与IR组比较,P0.05)。 2.应用2.

4在HSC细胞中,三种MAPK抑制因子均可抑制Imp7表达及入核。三种抑制因子均可抑制Imp8表达,p38抑制因子可减少Imp8入核。提示,在HSC细胞中ERK、JNK通路对Smad2/3/4复合物的转位入核的调控可能与Imp7/Imp8的表达及Imp7的入核有关；而p38通路对Smad2/3/4复合物的转位入核的调控可能与Imp7/Imp8表达及入核有关。而在HepG2细胞中,三种MAPK抑制因子均可抑制Imp7入核,尤其是p38抑制因子。ERK抑制因子、JNK抑制因子可抑制Imp8入核,p38抑制因子对Imp8核浆分布无明显影响。提示,在HepG2细胞中,ERK、.JNK通路对Smad2/3/4复合物的转位入核的调控可能与Imp7/Imp8的入核有关；p38通路对Smad2/3/4复合物的转位入核的调控可能与Imp7的入核有关。 5.5ERK、JNK、P38抑制因子均能明显抑制HSC细胞内TGF-β1诱导的靶基因PAI-lmRNA的表达。提示,ERK、JNK、p38通路均参与HSC细胞内TGF-p1信号通路靶基因PAI-1转录活性的调控。ERK、JNK、P38抑制因子均能明显抑制HepG2内TGF-β1诱导的靶基因PAI-1mRNA的表达。提示,ERK、JNK、p38通路均参与HepG2内TGF-β1信号通路靶基因PAI-1转录活性的调控。

FDA approved Drug Library制造商 总之,在HSC细胞内p38、ERK通路可能主要通过调控Smad3蛋白连接区的磷酸化及Smad2/3/4复合物的形成而影响靶基因PAI-1的转录,JNK通路主要通过调控Smad2/3/4复合物的转位入核影响靶基因PAI-1转录。而在HepG2细胞内p38通路可能主要通过调控Smad3蛋白连接区的磷酸化及Smad2/3/4复合物的形成而影响靶基因PAI-1的转录；ERK通路主要通过调控Smad2/3/4复合物的转位入核影响靶基因PAI-I转录；JNK通路可能通过调控Smad3蛋白连接区的磷酸化及Smad2/3/4复合物的形成及调控Smad2/3/4复合物的转位入核影响靶基因PAI-1转录。
摘要 第一章槟榔碱对原代培养口腔粘膜上皮细胞和成纤维细胞增殖、凋亡及DNA损伤作用的影响 目的：研究槟榔碱对原代培养口腔粘膜上皮细胞和成纤维细胞增殖、凋亡及DNA损伤作用的影响。 方法：体外培养、扩增口腔粘膜上皮和成纤维细胞,通过细胞形态学及角蛋白和波形丝蛋白免疫组织化学染色等鉴定细胞；MTT实验检测高浓度槟榔碱短时间干预及低浓度槟榔碱长时间作用对上皮细胞和成纤维细胞增殖的影响；流式细胞术分析槟榔碱干预对上皮细胞和成纤维细胞的细胞周期的影响；彗星实验检测槟榔碱对上皮细胞和成纤维细胞DNA损伤的影响。 结果：所培养的细胞具有典型的上皮细胞和成纤维细胞形态,角蛋白和波形丝蛋白染色阳性。高浓度(0.2mM-0.8mM)槟榔碱短期(0-72小时)作用于上皮细胞和成纤维细胞后,上皮细胞随槟榔碱浓度的增加及作用时间延长而活力下降,形态变化明显,差异具有统计学意义(P0.05)。在对细胞周期影响方面,0.8mmM槟榔碱干预48小时导致了上皮细胞位于G2/M期的比例相比对照组明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。0.6mM槟榔碱干预24小时可诱导上皮细胞出现凋亡,呈现剂量和时间的依赖性,差异具有统计学意义(P0.05)。低浓度槟榔碱显著抑制上皮细胞生长的条件是0.1mM作用12天后,差异具有统计学意义(P0.05)。各浓度槟榔碱作用成纤维细胞24小时后,成纤维细胞DNA损伤情况与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)；上皮细胞DNA损伤情况与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),且与槟榔碱具有浓度依赖性。低浓度槟榔碱(0.1mM)长时间(24小时)处理口腔粘膜上皮细胞后,细胞继续培养24小时,MMP-2表达显著高于对照组,差异有统计学意义(P
酸敏感离子通道(acid-sensing

ion channels, ASICs)是一类由胞外酸激活的阳离子通道,开放的通道对Na+、Ca2+有通透性,进而引起细胞一系列生理病理变化。目前为止,已发现4个基因编码的7个ASICs亚基(ASIC1a、ASIC1b、ASIC1b2、ASIC2a、 有 ASIC2b、ASIC3、ASIC4),均属于DEG/ENaC家族成员。近年来ASICs研究备受关注,其不仅在神经系统中存在表达并发挥疼痛、感觉、神经传递等调节作用,还在非神经系统如肿瘤、炎症、缺血性损伤、胃肠道疾病中发挥作用,这些病理反应中共同的特点是局部组织环境酸化、pH值下降,诱发ASICs激活导致Na+、Ca2+内流,进而引起各种病理生理效应。本课题组前期研究发现SD大鼠关节软骨中存在ASIC1a、ASIC2、和ASIC3的表达,在佐剂性关节炎(Adjuvant Arthritis, AA)大鼠关节软骨中ASIC1a、 ASIC2a和ASIC3的表达均明显高于正常组,ASICs非特异性阻滞剂Amiloride、非甾体类抗炎药阿司匹林能明显抑制。ASICs表达,并对AA大鼠关节软骨具有保护作用。进一步考察ASICs在关节炎中作用机制发现,当大鼠关节炎症发生时,可造成局部关节酸化,ASICs表达增加和通道开放,Ca2+流入关节软骨细胞内,导致关节软骨细胞外基质(Extracellular

时间 matrix, ECM)代谢失衡引起关节软骨损伤。 肝纤维化(hepatic fibrosis, HF)是慢性肝病的共同病理过程,是形成肝硬化的中间阶段。目前研究认为,病毒感染和酒精的过量摄入导致肝脏炎症是肝纤维化形成的主因。当炎症刺激时,肝脏产生氧化应激和脂质过氧化损伤,酸性代谢产物增加,肝星状细胞(Hepatic stellate cells, HSCs)活化增殖,转化为肌样成纤维细胞,表达α-SMA,合成和分泌细胞外基质(extracellular matrix, ECM)增加,导致ECM的合成与降解失衡,致使过多的ECM在肝组织沉积形成纤维化。该病理进程与关节炎症类似,即同样存在炎症导致的局部酸化,同样引起ECM代谢的失衡,那么,肝脏是否存在ASICs的表达?当肝纤维化时肝组织的酸性代谢会否导致ASICs的表达增加和通道激活,进而发挥其病理生理学作用?为此,我们研究以下内容： LASICla在大鼠肝组织、肝星状细胞的表达 分离大鼠肝组织,RT-PCR检测.ASIC1a mRNA表达,发现大鼠肝组织中存在ASIC1a的表达,CC14诱导的肝纤维化模型大鼠ASIC1amRNA表达增加；采用ASIC1a, α-SMA免疫荧光双标染色模型组大鼠肝组织,发现大鼠肝组织ASIC1a与α-SMA染色区域高度重叠,提示ASIC1a主要表达与活化肝星状细胞。肝灌注分离正常组、模型组大鼠HSC细胞进行RT-PCR, Western blot发现,正常组HSCs存在ASIC1amRNA及其蛋白表达,模型组表达高于正常组。选择HSC-T6表型活化细胞株,用酸诱导HSC-T6体外模型(pH6.0),考察不同pH值环境下ASIC1a在HSC-T6的动态表达,研究发现,与pH7.4组相比,pH6.0酸诱导HSC-T6组ASIC1a表达增加。 2.

05);与C组比较,M组和MS组MPAE升高,M组脊髓GSK-3β表达没有变化,MS组脊髓p-GSK-3β表达上调(P<0.05),DMSO组和S组上述指标差异无统计学意义;与M组比较,MS组MPAE升高,脊髓p-GSK-3β表达上调(P<0.05)。结论:脊髓GSK-3β信号通路可能参与了大鼠吗啡慢性耐受的形成。
随着手术和麻醉量的日益增加,尤其是高危手术如涉及心脏大血管的手术越来越多,围术期心血管不良事件逐渐引起麻醉医生的高度重视。应用各种措施和方法减少缺血缺氧所致的心肌细胞功能受损和心肌细胞死亡,成为围术期医学亟待解决的重大课题。麻醉药作为手术中必不可少的药物之一,可对术中及术后发挥心肌保护作用很早就得到广泛的关注。本文就目前临床常用麻醉药对心肌保护作用机制做一简要综述。1挥发性麻醉药
认知功能障碍主要表现为学习能力下降、忆力减退和理解、语言、判断受到影响,也可伴有神情淡漠、反应迟钝、表情呆滞等症状。认知功能依赖于足量的神经元及突触间的复杂联系。海马、下托、齿状、杏仁核、皮质等〔1〕区可以控制相关的认知功能。认知功能可受诸多疾病的影响:糖尿病、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病等。此外,也有很多信号通路影响认知功能,包括:环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路、PI3K/
缺血性心脏病发病率不断上升,成为全世界致死和致残的首要疾病,严重威胁人类的健康。随着经皮腔内冠脉血管成形术、心脏动脉搭桥术、溶栓等技术的广泛应用,缺血性心脏病的死亡率明显地下降,然而有时候缺血后再灌注,不仅不能使缺血的心肌功能恢复,反而加重心肌的功能障碍和结构损伤,称为心肌缺血-再灌注损伤。而近些年来,线粒体膜通透性转换孔(mitochondrial

NLG919购买 permeability transition pore,
胶质瘤是颅内最常见的原发中枢神经系统肿瘤,其中多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)占胶质瘤总病例数的一半左右,中位生存期仅14.6个月[1]。胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSCs)是形成胶质瘤和启动肿瘤快速增殖的初始细胞,并具有完整的成瘤能力[2]。GSCs的主要标志物是细胞分化标志133(cluster of differentiation 133,CD133)。近几年还发现多种干
In AC220 recent years,GSK3 has emerged

as a key regulatory kinase in the nervous system,which is involved in diverse processes ranging from 不 neural development to mood stabilization to neurodegeneration.In addition,it has been described as a regulator of several aspects of neural morphology such as polarization,
目的研究小分子药物二氯乙酸钠(DCA-Na)对人肺腺癌细胞株A549体外抗肿瘤及其诱导肿瘤细胞凋亡的作用,探讨其抗肿瘤作用的可能机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察A549细胞在不同浓度DCA-Na处理24、48、72 h后生长受抑制情况;使用流式细胞仪、透射电镜和Caspase 3试剂盒检测观察DCA-Na对A549细胞凋亡的影响。结果 DCA-Na能明显抑制A549细胞生长,呈浓度-时间依赖性;DCA-Na作用后电镜观察到典型的细胞凋亡形态学特征;Caspase

3试剂盒检测结果显示,DCA-Na可诱导A549细胞表达Caspase 3,其活性随DCA-Na剂量的增加而递增;与对照组比较,线粒体跨膜电位均明显下降,且去极化百分率随DCA-Na剂量及时间的增加而增加。结论 DCA-Na可诱导A549细胞株凋亡,线粒体跨膜电位下降可能是其诱导细胞凋亡的重要机制。
目的:通过观察针刺”百会”透”曲鬓”穴头针疗法对急性脑出血大鼠脑组织形态学及脑组织中β-catenin表达的影响,研究针刺对脑出血后NSCs增殖分化的影响及其与Wnt信号通路关键因子β-catenin的关系,阐明针刺促进脑出血后神经重塑的作用机制。方法:选用雄性Wistar大鼠按随机数字表法随机分为空白组、模型组、针刺组、通路激动剂(SB216763)组;每组再随机分为1天、3天、7天、14天4个亚组。模型组采用立体定向手术自体血注入法制备脑出血模型;针刺组大鼠针刺患侧”百会”透”曲鬓”穴。在光镜下观察各组大鼠脑组织形态学改变;运用蛋白免疫印迹方法检测和免疫组化方法检测各组大鼠脑组织β-catenin的阳性细胞表达以及针刺治疗对它们的影响。结果:针刺及激动剂组可明显改善大鼠神经功能缺损评分,与模型组比较,有显著性差异(P<0.05)。模型组、针刺组及SB216763组大鼠灶周组织β-catenin阳性细胞数表达均随时间点变化逐渐增加,3天时达高峰值,7天逐渐减少,14天时仍有表达;针刺组、SB216763组分别与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.

16）。对全部146例晚期NSCLC血浆样本进行了KRAS基因检测，发现KRAS基因突变9例，突变率为6.16%（9/146），与组织样本KRAS基因突变率相比，无统计学差异（P=0.919）。 3.对40例血浆和组织配对样本进行基因检测，发现组织EGFR突变15例，血浆EGFR突变13例，其中11例突变在组织和血浆中同时检测到，两种样本EGFR基因检测的一致性为85.0%（34/40）。以组织基因检测为金标准，血浆EGFR突变检测的灵敏度为73.33%（11/15），特异度为92%（23/25）。在40例组织中检测到KRAS突变1例，配对的血浆中未检测到KRAS突变。血浆和组织中KRAS基因突变检测一致性为97.5%（39/40）。

Bax protein 4.晚期NSCLC肿瘤组织和血浆中EGFR突变与临床病理特征的关系：晚期NSCLC患者组织中的EGFR突变与吸烟史、肿瘤类型间有显著统计学意义。非吸烟患者EGFR突变率明显高于吸烟患者（P=0.013），腺癌中EGFR突变率明显高于非腺癌（P=0.022）。女性患者的EGFR突变率（47.83%）高于男性（26.839%），统计学差异不甚明显（P=0.09）。但组织EGFR突变率与年龄（P=0.913）、PS评分（P=0.702）、临床分期（P=0.164）间均无统计学意义。晚期NSCLC患者血浆中EGFR基因突变与年龄、性别、肿瘤类型、分期、吸烟史、PS评分的相关性分析中均未发现显著统计学差异（P﹥0.05）。 5.晚期NSCLC肿瘤组织和血浆中KRAS检测与临床病理特征的关系：晚期NSCLC患者肿瘤组织和血浆中KRAS基因突变与年龄、性别、肿瘤类型、分期、吸烟史、PS评分的相关性分析中均未发现显著统计学差异（P﹥0.05）。 6.接受TKI治疗的患者共有38例，血浆EGFR突变者的疾病控制率（DCR）和客观缓解率（ORR）分别为90%（9/10）和60%（6/10），EGFR野生型患者的DCR和ORR分别为（53.57%，15/28）和（17.86%，5/28）。血浆EGFR基因是否突变，与TKI治疗疗效有关（DCR，P=0.059；ORR，P=0.019）。 7.接受TKI治疗的患者中，血浆KRAS野生型患者的DCR和ORR（66.67%，22/33；33.33%，11/33）高于KRAS突变患者（40%，2/5；0%，0/5）。但统计学差异不明显（DCR，P=0.337；ORR，P=0.295）。

EGFR 抑制剂 8.接受TKI治疗的患者，总体中位PFS为6个月，EGFR基因19和21外显子突变的患者中位PFS为10.5个月，较EGFR野生型患者的中位PFS（5.1个月）显著延长，但统计学意义不明显（P=0.228）。KRAS突变的患者病情进展较快，其中位PFS仅为2.5个月，明显小于KRAS野生型患者的PFS（9个月），两组患者PFS具有显著统计学差异（P=0）。 结论： 1、晚期NSCLC血浆和组织中EGFR和KRAS基因突变具有高度的一致性，血浆样本可以作为组织样本的良好替代。 2、焦磷酸测序技术具有操作简便、高通量检测的特点，与ME-PCR的结合可有效富集突变型EGFR基因，可以准确检测出血浆EGFR和KRAS基因突变，可用于筛选适合TKI治疗的NSCLC患者，有利于指导NSCLC患者的个体化用药。 3、晚期NSCLC组织中EGFR突变更多见于不吸烟的女性腺癌患者。组织中KRAS突变、血浆中EGFR及KRAS突变与临床病理特征间无显著统计学差异。 4、血浆EGFR突变是TKI治疗的敏感性指标，其PFS较长；血浆KRAS突变则预示患者预后较差，PFS较短，表明血浆EGFR和KRAS突变可以较好的预测晚期NSCLC患者TKI治疗的疗效和预后。
背景

近年来，我国肺癌的发病率和死亡率一直呈上升趋势，每年新发病人大约有50万例，并以年5%的速度递增，其中75%-80%为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancerNSCLC)，总的5年生存率不到15%。而伴有远处转移的晚期NSCLC，自然病程的中位生存期只有4-5个月，1年生存期不足10%。以手术、化疗和放疗为主的传统治疗方法已进入一个瓶颈期，而分子靶向治疗正逐渐成为晚期NSCLC的重要手段。许多大型临床试验表明，以表皮生长因子受体的酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)为代表的分子靶向治疗可延长患者的生存期，但EGFR-TKI的疗效与EGFR/KRAS基因的状态密切相关。其中EGFR的18、19、21外显子突变及20外显子T790M突变分别是EGFR-TKI的敏感和耐药指标，KRAS基因突变则是EGFR-TKI的耐药指标。因此，在接受TKI治疗前进行EGFR/KRAS基因状态检测对指导靶向治疗非常重要。目前，NSCLC分子靶点EGFR/KRAS基因检测多为手术切除的肿瘤组织标本。然而，临床上，常常遇到无法获得肿瘤组织标本的情况，EGFR/KRAS基因检测成为困难，严重限制了NSCLC患者的分子靶向治疗选择。因此，探索组织标本的良好替代物及其检测方法，在NSCLC临床诊治中势在必行，具有非常重要的临床意义。 PR 171 目的 本研究旨在通过对伴有胸腔积液的NSCLC患者进行胸水EGFR/KRAS基因检测，建立非组织来源EGFR/KRAS检测的替代方法，并探讨胸水EGFR/KRAS突变状态的临床意义，证实EGFR/KRAS基因突变与临床靶向治疗疗效的关系，为分子靶向治疗疗效预测提供实验依据。 方法 本研究通过我院伦理委员会批准，所有患者均已签署知情同意书。收集我科2011年3月至2012年3月符合纳入标准的NSCLC(IV期，UICC，2009版)， NSCLC合并胸腔积液的胸水标本共63例，NSCLC病理组织样本64例，其中与胸水相互配对的组织标本24例。用QIAGEN公司的体液及组织DNA提取试剂盒对上述标本进行DNA提取，用焦磷酸测序仪对全部63例胸水标本及64例组织标本的EGFR/KRAS突变状态进行检测分析。另随机选取其中30例胸水标本用锁核酸PCR桑格测序法(LockedNucleic Acids probes Polymerase Chain Reaction LNA-PCR-Sanger)检测KRAS基因状态，与焦磷酸测序进行对比，分析不同检测方法的敏感性。 采用卡方检验法比较不同检测方法的检测结果一致性、不同来源的标本EGFR/KRAS突变的一致性；比较EGFR/KRAS突变状态与患者性别、年龄、吸烟史、病理类型的关系；建立入组标准和排除标准，对接受靶向治疗患者进行分析，观察EGFR/KRAS基因状态与TKI疗效的关系。 结果 1.胸腔积液EGFR基因突变的焦磷酸测序检测 焦磷酸测序法在63例胸腔积液样本中检测出EGFR突变19例(30.16%)，全部为EGFR19/21外显子突变，其中EGFR19缺失突变10例(总突变的52.63%)，EGFR21外显子L858R突变9例(总突变的47.37%)。 2.胸腔积液KRAS基因突变的焦磷酸测序和LNA-PCR-Sanger检测 焦磷酸测序在63例胸水样本中检测出KRAS突变率为7.

检测已经建立的非小细胞肺癌放射抗拒细胞系的放射敏感性。 点击此处 2.初步探讨PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂LY294002和Rapamycin对大分割放疗的增敏作用。 方法： 1.体外培养A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞。3种细胞均接受射线照射,克隆形成实验检测照射后3种细胞增殖能力的差异；免疫荧光实验检测3种细胞放疗后24h残留的yH2AX焦点的差异。 2.体外培养A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞。实验分组：对照组(A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞)、LY294002组、Rapamycin组、LY294002+Rapamycin组,给予相应的射线照射。通过克隆形成实验检测加入抑制剂LY294002和／或Rapamycin后大分割放疗抗拒细胞放疗后的增殖能力；通过免疫荧光实验检测加入抑制剂LY294002和／或Rapamycin后大分割放疗抗拒细胞24h后的yH2AX焦点数。应用SPSS17.0统计分析软件包,实验数据以均数±标准差(x士S)表示,在检验数据正态分布及方差齐性的条件下,多组间数据比较采用方差分析,各组组间差异的比较用LSD—t检验。以P值<0.05),单抑制剂组与A549对照组相比未见明显差异,而双抑制剂组较A549组明显增加(P
目的：

观察5-aza-CdR对HepG2细胞增殖及Bax基因表达的影响，并探讨其与Akt表达的相关性，为肝癌的防治提供理论依据。 方法： 取浓度分别为0μmol/L、0.4μmol/L、1.6μmol/L、6.4μmol/L、25.6μmol/L和102.4μmol/L的5-aza-CdR处理HepG2细胞，5-aza-CdR作用24h、48h和72h后，用相差显微镜观察不同药物浓度和时间段的HepG2细胞形态学改变；采用MTT法检测5-aza-CdR对HepG2细胞的增殖抑制率；采用RT-PCR法和Westernblot法检测5-Aza-CdR对Akt、Bax mRNA和蛋白表达的影响。 结果： 1、 MTT法检测结果显示，与对照组比较，5-aza-CdR处理组的HepG2细胞增殖抑制率显著性增加，呈时间和浓度依赖性（均P
[目的]探索趋化因子Mig介导口腔舌鳞癌Tca8113细胞耐热的作用及相关分子机制。

[方法](1)Tca8113细胞常规培养后,分组处理：Mig处理组(100nM Mig因子处理Tca8113细胞6h),Mig+Akt抑制剂组(100nM Mig+12nM Akt抑制剂MK-2206同时处理Tca8113细胞6h),热诱导组(43℃80min水浴加热处理Tca8113细胞),Mig+热诱导组(100nM GDC-0941 价格 Mig处理Tca8113细胞6h后,43℃80min水浴加热处理Tca8113细胞),Mig+Akt抑制剂+热诱导组(100nM

Mig+12nM Akt抑制剂MK-2206同时处理Tca8113细胞6h后,43℃80min水浴加热处理Tca8113细胞)。(2) Full moon PCS248磷酸化蛋白芯片杂交技术检测Tca8113细胞及Mig处理组、热诱导处理组和Mig+热诱导处理组Tca8113细胞相关蛋白磷酸化水平,差异比较,行相关信号通路分析。(3)倒置显微镜观察各组细胞形态变化。(4)TUNEL标记流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。(5)流式细胞仪检测活化Caspase-3在各组活细胞中的比值及线粒体膜电位。(6)免疫印迹进一步验证分析相关信号通路蛋白磷酸化水平变化。(7)采用SPSS17.0统计软件对数据进行统计学分析。 [结果](1)Full moon PCS248磷酸化蛋白芯片杂交检测发现,热诱导处理Tca8113细胞后,5种蛋白磷酸化水平明显升高(升高2倍以上)；6种蛋白磷酸化水平明显降低(降低0.6倍以上)。有意义的是,细胞存活关键因子Akt2(Phospho-Ser474)及其下游信号通路转录因子eIF4E(Phospho-Ser209)磷酸化水平同时降低,而Mig预处理后再热诱导,两者磷酸化水平无明显降低。(2)热诱导处理Tca8113细胞24h后,细胞出现明显的凋亡形态学改变,Mig预处理后,其细胞凋亡数量明显减少,采用Akt抑制剂MK-2206联合处理后,Tca8113细胞凋亡数量明显恢复。(3) Everolimus厂商 TUNEL标记流式细胞仪检测细胞凋亡率,发现热诱导处理后Tca8113细胞凋亡率由(2.77±0.47)%升高至(33.97±1.08)%(p=0.000), Mig+热诱导联合处理后细胞凋亡率降至(17.78±2.1)%, Mig+Akt抑制剂+热诱导联合处理后细胞凋亡率恢复为(25.43±0.77)%。(4)热诱导处理后活化的Caspase-3在所有细胞中的比值由(10.93±1.17)%升高至(49.73±2.04)%(p=0.000), Mig+热诱导联合处理后降至(30.90±2.42)%,Mig+Akt抑制剂+热诱导联合处理后恢复为(44.53±1.59)%。(5)热诱导处理后Tca8113细胞JC-1单体含量由(10.3±0.92)%升高为(30.5±2.86)%(p=0.

本实验国内首次成功培养了小鼠原代RTECs;2.证实肾小管上皮细胞是AAⅠ作用的主要靶细胞;3. TGF-β1/Smads信号参与了AAⅠ诱导的EMT,SB-431542可抑制AAⅠ诱导的EMT;4.Smad7是AAⅠ作用的靶点之一。
目的肿瘤细胞分泌大量的转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β),具有潜在的免疫抑制功能。因此,肿瘤细胞能够逃避宿主细胞的免疫监视而进展和转移。肿瘤分泌的TGF-β抑制宿主的免疫系统,特别是细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)对其的识别杀伤。鉴于TGFβ在肿瘤发展过程中的负性免疫调节作用,使CTL对TGFβ失去敏感性可以恢复其对肿瘤的杀伤活性。因此,TGF-β是抗肿瘤治疗的重要靶点之一。肿瘤免疫治疗大多着眼于增强机体免疫系统的抗肿瘤活性,所以针对肿瘤免疫抑制的免疫疗法是很有前景的。肿瘤特异性CTL是体内抗肿瘤免疫最为有效的效应细胞,但其激活需要抗原呈递细胞(antigen-presenting AC220订单 cells,APC)处理并呈递相应的抗原。树突状细胞(Dendritic

cells,DC)是目前已知功能最强的APC,可以激活初始T细胞(naive T cell)和记忆性T细胞。DC可提供T细胞活化所需的共刺激信号,在体内外诱导CTL的生成。肿瘤组织匀浆、细胞裂解物包含全部抗原信息,用其致敏DC细胞,体外可以激发T细胞大量增殖,产生肿瘤特异性CTL。鉴于TGFβ在肿瘤发展过程中的负性免疫调节作用,使CTL对TGFβ失去敏感性可以恢复其对肿瘤的杀伤活性,用含有TβRⅡDNglytk质粒的慢病毒来感染肿瘤特异性CTL使其对TGFβ失去敏感性后发挥抗肿瘤效应。本实验中将HSV-tk引入,当肿瘤细胞被消除或CTL量过大时,给予适量GCV能够使这些CTL自杀,避免其产生毒副作用。

方法我们用TOPO技术将显性负相TGF-βⅡ型受体(dominant 不 negative TGFβtypeⅡreceptor,TDRⅡDN)与单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virusthymidine kinase,HSV-tk)连接起来后转入慢病毒载体,构建表达TβRⅡDNglytk的慢病毒,并构建TRANSglytk为对照;用DC、肿瘤组织匀浆、T淋巴细胞培养出肿瘤特异性CTL;然后以慢病毒为载体将TβRⅡDNglytk基因转染到肿瘤特异性CTL,从而去除了TGF-β对肿瘤特异性CTL的抑制作用,恢复CTL对肿瘤的识别杀伤;最后通过荧光抗体染色,Western-blot,MTT,流式细胞术等方法对其进行了分析、鉴定。Smad2/3磷酸化是TGFβ活化的直接结果,是TGFβ信号传导通路的关键点所在,TGFβ处理过的CTL若P-Smad2/3表达缺失则认为是TGFβ信号传导通路被阻断,细胞对TGFβ不敏感。Western blot分析不同类型CTL磷酸化的Smad2/3(P-Smad2/3)量可以鉴别其对TGFβ的敏感性。表达TRANSglytk的CTL为对照。 结果1利用重组PCR技术连接TβRⅡDN(TRANS)与HSV-tk连接起来转入慢病毒载体,测序验证正确,成功构建了表达TβRⅡDNglytk及对照TRANSglytk的慢病毒。 没有 2外周血来源PBMC,在IL-4、GM-CSF诱导下,可得到DC。负载肿瘤抗原DC,激活T细胞,可使其大量扩增,得到肿瘤特异性CTL。 3以慢病毒为载体可将TβRⅡDN-tk基因转染到肿瘤特异性CTL,Anti-v5-TIFC荧光抗体染色证实了转染成功,Western-blot检测P-Smad2/3蛋白表达明显减少,证明转染TβRⅡDNglytk基因后TGF-β信号传导通路阻断,对正常表达的TGF-βⅡ型受体产生了竞争性抑制作用。

4转染TβRⅡDN-tk,TRANS基因对淋巴细胞表型,凋亡,周期无明显影响。GCV对携带HSV-tk自杀基因的TGF-β不敏感CTL杀伤活性结果表明GCV能够杀死经慢病毒转染后表达HSV-tk的细胞,而未转染组细胞几乎无死亡。 结论对TGF-β不敏感肿瘤特异性CTL培养成功及鉴定表明:这一方法在肿瘤免疫治疗中具有潜在的应用前景,为肿瘤的过继免疫治疗提供了又一新的思路。
目的:通过选择适当的诱导剂,探讨胚胎干细胞体外向血管平滑肌细胞分化的趋势。观察胚胎干细胞在体外不同条件下定向诱导分化血管平滑肌细胞的能力。 方法:实验于2006年8月至2007年2月在南昌大学第二附属医院血液病研究所完成。①动物及细胞系:清洁级孕12.5天的昆明小白鼠1只,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准;小鼠胚胎干细胞系129X/SvJ由美国ATCC提供。②实验方法:从12.5天的胎鼠中分离出原代胚胎成纤维细胞,当原代胚胎成纤维细胞传至3～5代时,更换为含体积分数为0.15胎牛血清的DMEM高糖培养基,24小时后收集培养液,加入条件培养基。用其对小鼠胚胎干细胞进行体外培养,传代时用差速贴壁法分离去除已分化的胚胎干细胞,经过悬滴-悬浮培养,构建拟胚体分化模型。设立3组,各组均置于0.

As its treatment mainly involves surgery,radiotherapy alone is seldom reported in literature.Here we report a case of lowly malignant cranial IMT with intracranial invasion in a female patient. As surgery was not suitable,intensity modulated radiation therapy(IMRT) was administered.After radiotherapy,the cranial lesions tended to show efficacy.
肺癌是世界范围内常见的癌症,目前肺癌已经成为全球第一癌症杀手,每年全球肺癌的新发病例超过120万。肺癌一般分为小细胞肺癌(snall celllung cancer,SCLC)和非小细胞肺癌(non-snall celllung cancer,NSCLC)两种基本类型,中国的每年新发肺癌病例超过48万,其中NSCLC的构成比最高,
综述CXCL12(SDF-1)/CXCR4轴在肺癌发生、发展过程中调节肺瘤微环境与调控肺瘤进程的作用机制,以及中医药通过调控CXCL12/CXCR4生物轴抑制肿瘤细胞增殖与黏附、抗肿瘤血管生成、抗肿瘤转移作用的研究进展。
正如《2012年全球新药研发报告》第一部分所提及的,2012年有大量药物获得批准;而在上市新药中,相当一部分是用于治疗发病率较低的一些疾病的孤儿药。虽然这些药物不会成为”重磅炸弹”产品,但对于小范围的患者来说却是一大福音。这一发展方向顺应了制药业从通用型”重磅炸弹”药物生产转向个体化药物研发的趋势。许多制药公司将其作为解决专利悬崖问题的策略,原因在于2012年有大量专利到期药物都作为仿制药获批。该报告的第二部分总结了新药、生物仿制药及新上市的化学仿制药的新进展,以及制药行业内部如何通过战略性调整巩固其市场地位,如通过兼并并购、子母公司与产权转让等努力获得领先地位。这部分还包含了大量便于快速查阅的数据图表以及制药行业内的战略性调整的大致介绍。更多详细信息,例如作用机制、研究现状、药理学研究、药动学研究、临床研究发现及更新信息等可以查阅ThomsonReutersIntegritySM和ThomsonReutersCortellisTM数据库。
非小细胞肺癌(non-small

什么 购买3-MA cell lung cancer,NSCLC)是成年人常见的恶性肿瘤之一。随着NSCLC分子生物学和新药开发研究的不断深入,基于分子标志物的靶向治疗已从实验室走到了临床,并在晚期NSCLC患者的治疗中取得了显著的效果。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因、间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)基因、KRAS基因、BRAF基因是目前NSCLC靶向治疗研究的重要靶点,针对EGFR和ALK基因的靶向药物已相继被用于临床。
2010ASCO四大研究展示·2010,6,4—2010,6,8,ASCO在美国芝加哥召开,到会者来自世界各地的肿瘤学者3万余人;·6日13时整,一场规模空前的全体大会报告(plenary session)将本届ASCO年会推向高潮,4项重量级研究结果在3万与会者的关注中揭晓,三大领域的世界级专家即时给予了权威点评。
表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)吉非替尼和厄洛替尼是治疗晚期非小细胞肺癌的有效靶向药物,尤其是对于选择人群,如腺癌、女性和不吸烟者。研究表明,EGFR突变型患者有效率
目的个体化医疗(personalized/individualized

而且 medicine)就是通过对个体携带的信息进行检测,制定针对某些疾病的预防和治疗策略,使患者获得最佳治疗效果的同时尽可能避免药物不良反应。如今,它己成为恶性肿瘤等重大疾病临床治疗的发展方向。方法本文通过介绍乳腺癌、肺癌、结直肠癌、淋巴瘤等几种常见肿瘤的个体化化疗、靶向治疗的研究现状以及肿瘤分子标志物的检测方法 ,阐述了国内外肿瘤个体化治疗的现状,以及肿瘤个体化医疗的新进展。结果与结论针对不同作用靶点的抗肿瘤药物层出不穷,不断总结和完善诊疗策略,必将实现真正的肿瘤个体化治疗。
本文对几种传统抗肿瘤药物,烷化剂、铂络合物、蒽环类以及破坏DNA的抗生素在肿瘤治疗中的应用进行简要介绍,随着对化疗药物作用机理研究的深入及药物合成提取技术的提高,许多新的抗肿瘤靶点和与之对应的抗肿瘤药物不断被研究出来并应用于临床,为抗肿瘤药物的研究带来了希望。
在肺癌领域,2013 ASCO会议覆盖了靶向治疗、化疗、免疫治疗及生物标志物的研究。现将本年度会议在肺癌方面的主要转化性研究进展摘述如下:1.肺癌分子靶点的多基因检测和筛查意义重大:有助临床实践和临床试验,能显著改善患者生存。主要报道有法国报道10000例的肺癌BM项目研究、美国LCMC项目的进展、美国Sloan-Kettering纪念医院(MSK)的肺鳞癌(MSK-SQC)项目进展,多数研究者引用了2012年的”癌症基因组图谱项目”(TCGA,The Cancer Genome Atlas Project)的结果。这些大样本的多基因的检测和筛查项目均得到类似的结果,凸显了多分子变异检测…
Objectives We aimed to investigate whether over-expression of miR-210, an oxide-related miR, could protect mesenchymal stromal cells (MSCs) against apoptosis induced by oxidative stress, and if so, what the potential mechanisms involved. Methods MSCs, derived from male SD rats, with forced expres…

The combination of transporters modulators/inhibitors with molecular targeted therapies may be a potent strategy to block the tumoral progression. This review summarizes http://www.selleckchem.cn/products/incb28060.html the association of CSCs, drug resistance, ABC transporters activities and changes in signaling pathways as a guide for future molecular therapy for HCC.

近年来,小细胞肺癌(SCLC)靶向治疗药物的研究明显增加。靶向治疗药物包括血管生成抑制剂、酪氨酸和Src家族激酶抑制剂、重组分子、bcl-2抑制剂、sonic hedgehog信号传导通路抑制剂等,其中,研究最为广泛的是血管生成抑制剂贝伐单抗(bevacizumab)、小分子酪氨酸激酶抑制剂和沙利度胺(thalidomide)。文章就一些主要的靶向药物治疗小细胞肺癌的情况作一综述。
脂肪间充质干细胞(ADMSCs)是一类具有多向分化潜能、免疫调控功能和自主更新能力的干细胞。ADMSCs可通过诱导分化为肝样细胞,参与细胞趋化与黏附、抗纤维化及免疫调节而发挥治疗肝衰竭的作用。通过搭载目的基因来强化或改善ADMSCs干细胞功能活性的方法对急性肝脏衰竭的保护作用明显增强,基因水平的实验研究对进一步发掘ADMSCs的作用和价值意义重大。
髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)是小儿中枢系统常见的恶性肿瘤。SHH(sonic

还有 hedgehog signaling pathway)信号通路是小脑的发育形成过程中重要的信号通路,它可以调控神经细胞发育和增殖,维持小脑正常的功能结构。该通路异常激活会导致小脑细胞异常增殖而出现MB,是MB形成过程中最具有特异性通路之一。SHH信号通路的靶向抑制剂目前得到了广泛的研究,在许多与SHH信号通路相关的肿瘤治疗过程中取得了良好的治疗效果,但是这些靶向抑制还是存在耐药性和药物不良反应等问题。因此,本文就MB发病机制中的SHH信号通路和针对该信号通路靶向治疗做一综述。
The hedgehog signaling cascade is an evolutionarily conserved pathway that regulates multiple aspects of embryonic development and plays a decisive role in tissue homeostasis. As selleck怎么样 the best studied member of three hedgehog ligands, sonic hedgehog(Shh) is known to be associated with kidney development and tissue repair after various insults. Recent studies uncover an intrinsic link between dysregulated Shh signaling and renal fibrogenesis. In various types of chronic kidney disease(CKD), Shh is upregulated specifically in renal tubular

epithelium but targets interstitial fibroblasts, thereby mediating a dynamic epithelialmesenchymal communication(EMC). Tubule-derived Shh acts as a growth factor for interstitial fibroblasts and controls a hierarchy of fibrosis-related genes, which lead to the excessive deposition of extracellular matrix in renal interstitium. In this review, we recapitulate the principle of Shh signaling, its activation and regulation in a variety of kidney diseases. We also discuss the potential mechanisms by which Shh promotes renal fibrosis and assess the efficacy of blocking this signaling in preclinical settings. Continuing these lines of investigations will provide novel opportunities for designing effective therapies to improve CKD prognosis in patients.

4)洗涤3次×5min；除去PBS液,每张切片加50uL生物素标记的羊抗小鼠二抗,室温下孵育20min,孵育后PBS冲洗3次,每次5min；甩去PBS液,滴加50uL链霉菌抗生物素-辣根过氧化物酶溶液,室温孵育40min,PBS冲洗5min×3次；DAB显色3-5min,显微镜下控制,自来水冲10min-15min终止反应,苏木素复染约3min,梯度酒精脱水和二甲苯透明后中性树胶封片。结果判断由两个独立的病理医生无相关样本临床资料的信息分析,出现结果不一致时重新判片,直至达成一致意见。结果判定的标准：以细胞浆出现棕黄色颗粒的细胞定为阳性细胞,每张切片采用盲法随机观察10个高倍镜视野(×400),结果采用半定量计分方法,根据细胞染色强度(A)和染色细胞所占的比例(B)两者乘积来判定。

3、采用RT-PCR方法检测膀胱尿路上皮癌组织及其对应的癌旁正常膀胱组织由Nodal mRNA表达水平,并分析Nodal mRNA表达与膀胱尿路上皮癌病理分级及临床分期的关系 GenBank上查找NodalmRNA序列,并应用在线引物设计软件Premier Primer5.0和Oligo6设计相关引物。引物均由上海英骏生物技术有限公司合成。按照Trizol Reagent说明书将总RNA提取后,按70℃5min,37℃5min,42℃60min,70℃10min进行反转录合成cDNA,加4uL反转录DNA产物于25uLPCR反应体系中,94℃5min,94℃30s,55℃45s,72℃1min,循环36次。选择β-actin为PCR内参。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像系统分析后,计算待测指标与B-actin A值的比值。应用SPSS13.0软件进行统计学分析比较膀胱尿路上皮癌生物学行为与Nodal mRNA表达之间的关系,PⅡ级(PⅠ级(PT1期>Ta期(P均
目的：近年来，有研究表明GDF-15可以诱导外周单个核细胞（PBMC）中Foxp3转录水平的的增加，Foxp3是调节性T细胞（Tregs）的标志性分子，那么GDF-15对Tregs分化发育及功能有何影响呢？因此本研究拟探讨GDF-15在体外诱导人Na ve CD4~+T细胞向Tregs分化过程中的作用及其影响；通过临床样本观察结直肠癌患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞比例和血清中GDF-15表达水平的相关性；初步探讨GDF-15在iTregs分化中的分子作用机制。 CP-673451浓度 方法：本课题设计了以下三个方面实验：1、GDF-15诱导iTregs分化及其功能的鉴定。通过采取免疫磁珠法分选Na ve CD4~+T细胞，经GDF-15刺激后，通过Real-time PCR、流式细胞术检测标志性分子Foxp3、CD25，GITR，CD103等的表达，通过Real-time PCR、ELISA检测抑制性细胞因子IL-10和TGF-β等的分泌从而鉴定GDF-15诱导的iTregs表型，进一步用BrdU掺入和CFSE检测诱导的iTregs对效应CD4~+T细胞增殖的影响，同时收集培养细胞上清用ELISA检测诱导的iTregs分泌的功能相关细胞因子IL-10和TGF-β等。2、收集临床标本，流式细胞术检测外周CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞比例以及ELISA检测血清中GDF-15浓度，进而分析两者相关性；3、GDF-15在iTregs分化中的分子作用机制研究。利用激光共聚焦实验观察GDF-15在Na

ve CD4~+T细胞膜表面的表达情况，进一步用TGF-β受体阻断剂阻断后，Real-time PCR检测相关基因的转录水平。 结果：第一部分GDF-15诱导iTregs分化及其功能的鉴定的实验结果显示GDF-15能诱导Na 点击此处 ve CD4~+T细胞向iTregs表型分化，且在GDF-15浓度为10ng/mL诱导5天时Foxp3的表达量最高，Real-time

www.selleck.cn/screening/ion-channel-ligand-library.html PCR和流式细胞术显示iTregs的相关功能分子如Foxp3、CD25、GITR和CD103均表达升高。在进行相关功能检测中，Real-time PCR和ELISA实验显示iTregs可以分泌功能相关的抑制性细胞因子IL-10和TGF-β，BrdU掺入和CFSE实验结果进一步证实诱导的iTregs具有抑制效应CD4~+T细胞增殖的作用。第二部分临床实验通过SPSS13.0分析表明结直肠癌患者外周CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞与血清中GDF-15表达水平两者之间具有良好的相关性，相关系数达到0.7909。第三部分GDF-15在iTregs分化中的分子作用机制的实验中，通过激光共聚焦检测发现，GDF-15在Na ve CD4~+T细胞膜表面存在定位现象，Real-time PCR结果显示TGF-β受体阻断剂SB431542可以抑制GDF-15诱导Na ve CD4~+T分化过程中Foxp3的表达。 结论：GDF-15可以在体外诱导Na ve CD4~+T细胞向调节性T细胞方向分化，同时表现出天然调节性T细胞的表型和抑制功能；临床上结直肠癌患者外周CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞与血清中GDF-15表达水平表现出良好的相关性；初步确认了GDF-15可以在Na ve CD4~+T细胞表面存在定位现象，提示Na ve CD4~+T表面可能有GDF-15受体的存在。
目的：探讨TGF-β1/Smad信号通路在食管鳞癌上皮-间质转化（EMT）的作用及其机制；在细胞学实验的基础上探讨TGF-β1/Smad信号通路蛋白和EMT相关蛋白在哈萨克族食管鳞癌中的表达，分析其与临床病理特征的关系，为深入研究TGF-β1/Smad信号通路调控哈萨克族食管癌EMT的发生发展作用机制奠定基础，为食管癌浸润转移的阻断治疗提供理论基础。 方法：用不同浓度的重组TGF-β1刺激及TGFβ受体抑制剂SB431542抑制处理食管癌细胞Eca109，采用Western Blot方法检测TGF-β1/Smad通路和EMT相关蛋白表达水平；Transwell侵袭实验检测侵袭和迁移能力；进一步运用免疫组化检测100例食管鳞癌组织和58例癌旁非癌组织构成的组织芯片，研究TGF-β1/Smad信号和EMT相关蛋白的表达，分析TGF-β1/Smad和EMT相关蛋白与临床病理参数的关系。 结果： TGF-β1处理Eca109细胞，可以诱导细胞发生EMT形态改变，并且增强细胞侵袭能力，Western Blot检测发现N-cadherin、Vimentin、Smad2/3和Smad4蛋白表达显著上调，但Smad7蛋白表达下调；而SB431542处理细胞，结果显示：Vimentin、Smad2/3和Smad4蛋白表达水平下调，Smad7蛋白表达水平上调；免疫组化检测哈萨克族食管鳞癌组织中TGF-β1、p-Smad2/3、N-cadherin和Vimentin蛋白表达明显高于癌旁组织中的表达（p＜0.001），E-cadherin蛋白在食管鳞癌组织中的表达低于癌旁组织中的表达（p＜0.

To further characterize the apoptotic cascade initiated by IL- 1β after SCI, we examined the expression of IL-1β, p38 mitogen-activated protein kinase

(p38 MAPK) and caspase-3 after SCI, and further investigated whether p38 MAPK was involved in neuron apoptosis induced by IL- 1β. Methods: Adult rats were given contusion SCI at the T-10 vertebrae level with a weight-drop impactor (10 g weight dropped 25.0 mm). The expression levels of IL-1β, p38 MAPK and caspase-3 after SCI were assessed with Western blots, immunohistochemistry staining, and real time reverse transcription polymerase chain reactions (RT-PCR). Neuron apoptosis was assessed with the terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate-biotin nick end labeling (TUNEL) 17-AAG体内 method. Results: Increased levels of IL-1β and p38 MAPK were observed soon after injury, with a peak in expression PD0325901细胞系 levels within 6 h of injury. By 24 h after injury, caspase-3 expression was markedly increased in the injured spinal cord. TUNEL-positive cells were first observed in the lesioned area

6 h after SCI. The largest number of TUNEL-positive cells was observed at 24 h post-SCI. Intrathecal injection of the IL-1 receptor antagonist IL- 1Ra significantly reduced

expression of p38 MAPK and caspase-3, and reduced the number of TUNEL-positive cells. Moreover, intrathecal injection of an inhibitor of p38 MAPK, SB203580, also significantly reduced the expression of caspase-3, and reduced the number of TUNEL-positive cells in the injured spinal cord. Conclusion: The p38MAPK signaling pathway plays an important role in IL-1β mediated induction of neuron apoptosis following SCI in rats.
缺血缺氧性预适应普遍存在于机体的各器官,其机制尚未阐明。丝裂素活化蛋白激酶家族(mitogen activated protein kinases,MAPKs)是将胞外刺激信号转导至胞核介导细胞产生反应的细胞信息传递的共同通路之一,其在缺血缺氧预适应中的作用及机制成为人们关注的焦点。
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein Selleckchem MK-2206 kinase,MAPK)信号传导通路在炎性反应性疾病病理生理过程中调控作用的研究是近10年的新进展。其中p38MAPK信号传导通路在呼吸道粘膜炎性反应中的意义较为重要,本文就其参与炎症反应的机制以及对上皮细胞、炎性细胞和糖皮质激素受体(CR)的调控作用进行综述。
目的探讨中药脑溢安颗粒(简称脑溢安)对神经干细胞缺氧损伤的影响及其保护作用机制。方法体外培养神经干细胞来自新生3~5dSD大鼠海马组织,造缺氧损伤模型,用原位末端标记法(TUNEL)进行细胞凋亡检测,应用免疫共沉淀、激酶反应及Westernblot技术研究脑溢安对缺氧损伤神经干细胞内p38丝裂原活化蛋白激酶(p38Mitogen-activatedproteinkinase,p38MAPK)活性的影响。结果培养神经干细胞缺氧损伤后发生凋亡,脑溢安能促进缺氧损伤神经干细胞存活及减少神经干细胞凋亡;缺氧损伤后神经干细胞内p38MAPK活性增强,脑溢安血清组p38MAPK活性显著低于模型组和正常血清组(P<0.