The latter are referred to as MAPK-activated protein kinases.This review focuses on one such MAPK-activated protein kinase,MAPK-activated protein kinase 5(MK5)or p38-regulated/activated protein kinase(PRAK).This protein is highly conserved throughout the animal kingdom and seems to be the target of both conventional and atypical MAPK pathways.Recent findings on the regulation of the activity and subcellular localization,bona fide interaction partners and physiological roles of MK5/PRAK are discussed.
目的初步探讨青蒿素(artemisinin,Art)体内外发挥免疫抑制作用的调控机制。方法体外研究检测Art对小鼠淋巴细胞增殖及细胞毒性的影响。体内研究中,通过迟发型超敏反应(delayed-type

hypersensitivity,DTH)小鼠模型,分析不同剂量Art对小鼠DTH的效应;RT-PCR技术检测Th1和Th2细胞转录因子T-bet及GATA-3的基因表达;ELISA法检测转化生长因子β1(transforming

此网站 growth factorβ1,TGF-β1)的含量;Western blot方法检测p38丝裂酶原激活蛋白激酶(p38 MAPK)蛋白的活性表达水平。结果 Art明显抑制刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)诱导的T淋巴细胞增殖;与地塞米松相比,具有更高的安全性。体内给药后,Art能够减轻DTH小鼠耳肿胀;降低小鼠的脾指数和胸腺指数;调节Th1/Th2细胞分化过程中特异性转录因子T-bet和GATA-3的mRNA表达水平;增加TGF-β1水平;抑制p38 和 MAPK的磷酸化活性表达。结论提取自传统中草药的Art是一种高效低毒的新型免疫调节剂,通过多种途径发挥免疫抑制作用。
目的:探讨核转录因子(NF)-κB在铁负荷过低上调巨噬细胞、泡沫细胞炎症因子反应中的作用。方法:将巨噬细胞和泡沫细胞给予NF-κB抑制剂预处理,加入或不加入铁离子鳌合剂去铁胺(DFO)继续培养24 h,用West-ern blot测定细胞中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)蛋白的表达。于巨噬细胞和泡沫细胞中加入DFO刺激,用Western blot测定细胞核中NF-κB p65蛋白的表达。将巨噬细胞和泡沫细胞给予p38 MAPK信号通路抑制剂或视黄醛x受体(RXR)的天然配体预处理,加入DFO刺激,用Western blot测定细胞核中NF-κB p65蛋白的表达。结果:NF-κB抑制剂可抑制DFO对巨噬细胞、泡沫细胞中EMMPRIN上调的作用。DFO可促进巨噬细胞、泡沫细胞细胞核中NF-κB p65蛋白的表达。p38 MAPK通路抑制剂或RXR配体可抑制DFO对NF-κB p65蛋白水平上调的作用。结论:NF-κB参与了铁负荷过低上调巨噬细胞和泡沫细胞中EMMPRIN表达的过程。RXR配体对铁负荷过低上调炎症反应的抑制作用,同其抑制NF-κB激活有关。
近年来研究发现促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)对各种心血管损伤具有心肌保护作用。氨甲酰化促红细胞生成素(carbamylated Selleckchem Depsipeptide EPO,CEPO)是EPO的一种衍生物。与EPO相比,CEPO没有促进红细胞生成的能力,仍具有心肌保护功能。EPO和CEPO对心肌保护作用的发现为临床心肌保护的研究提供了新的思路和方法。
肝星状细胞(HSCs)是肝脏的一种间质细胞,它在肝纤维化过程中起着核心作用。各种慢性肝损伤可引起肝星状细胞的激活并转化为肌成纤维细胞,从而使得其合成各种细胞外基质最终导致肝纤维化。近年来,国内外学者对HSCs的激活和凋亡的信号转导途径的研究,为治疗肝纤维化提供了指导。本文简要综述了肝纤维化时HSCs的激活和凋亡的信号转导通路。
烧伤休克延迟复苏,是指烧伤休克已经发生并持续了一段时间后才开始的液体复苏治疗,往往得不到预想的疗效,在后续病程中多脏器功能衰竭的发生率和病死率都很高。本文通过大量查阅近年来与烧伤休克延迟复苏相关的文献,总结了烧伤休克延迟复苏的定义和临床特点,阐述了其引起重要脏器细胞损伤的三大主要机制——细胞内钙超载、氧化应激和蛋白酶异常活化,并在此基础上综述了近年来针对上述三大损伤机制的新的措施理念和新研发药物的相关进展。
Objective:

HER-2 plays an important role in the development and progression of ovarian carcinoma. A number of monoclonal antibodies (MAbs) and engineered antibody fragments (such as scFvs) against the subdomain II or IV of HER-2 extracellular domain (ECD) have been developed. We investigated the effect of chA21, an engineered anti-HER-2 antibody that bind primarily to subdomain I, on ovarian carcinoma cell invasion in vitro, and explored its possible mechanisms. Methods: Growth inhibition of SK-OV-3 cells was assessed using a Methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay. The invasion ability of SK-OV-3 was determined by a Transwell invasion assay.

5小时鞘内分别注射P2X7受体拮抗剂oxATP和BBG,均可阻断脊髓LTP的产生；强直刺激前7天鞘内注射的P2X7受体的小干扰RNA片段,也阻断脊髓LTP的产生；离体脊髓切片上预先应用BBG灌流1小时,可阻断强直刺激李骚束所诱发的脊髓兴奋性突触后场电位的LTP,而不影响基础反应。以上表明,P2X7受体在脊髓场电位的LTP产生中具有至关重要的作用。 强直刺激前0.5小时鞘内分别注射oxATP和BBG及强直刺激前7天鞘内注射P2X7受体小干扰RNA片段,在强直刺激后3、5和7天均可部分缓解强直刺激所诱发的双侧触诱发痛;强直刺激前0.5小时鞘内注射BBG可明显抑制强直刺激后2小时Fos的表达上调。表明拮抗P2X7受体功能可显著抑制脊髓痛敏神经元的活动过度增强。免疫组化结果表明,P2X7受体与小胶质细胞标志物OX-42共标,而与星形胶质细胞标志物GFAP及神经元标志物NeuN无共标；强直刺激坐骨神经激活脊髓小胶质细胞和明显上调P2X7受体的表达,且均可被强直刺激前0.5小时鞘内注射P2X7受体拮抗剂BBG所抑制。以上表明脊髓LTP的阻断是小胶质细胞P2X7受体的特异性的作用。强直刺激坐骨神经可诱发脊髓p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated

为什么 protein kinase, MAPK)磷酸化、其下游分子IL-1β的表达及在LTP中发挥关键作用的AMPA受体的GluR1亚基表达的显著增加,且均可被强直刺激前0.5小时鞘内注射P2X7受体拮抗剂BBG所抑制；强直刺激前0.5小时鞘内注射IL-1β特异性抗体IL-1ra可阻断脊髓LTP的产生,并且可抑制GluR1的表达上调。以上表明,P2X7受体参与脊髓伤害性反应长时程增强的产生是通过IL-1β信号通路激活而实现的。

免疫组化结果表明,小胶质细胞和星形胶质细胞分别在强直刺激后第3天和第7天被激活；Western blot结果表明,强直刺激可导致P2X7下游分子IL-18及其受体的表达增加。以上过程均可被强直刺激前1小时至强直刺激后7天每天1次连续注射小胶质细胞抑制剂美满霉素抑制。免疫双标结果显示,IL-18绝大部分与小胶质细胞标志物Iba-1共标,少量与星形胶质细胞标志物GFAP共标,而与神经元标志物NeuN无共标,而IL-18受体仅与星形胶质细胞标志物GFAP共标。以上结果表明,小胶质细胞和星形胶质细胞之间的相互作用参与病理性痛的维持,此过程很可能是由IL-18信号通路介导。 综上所述,本研究表明,小胶质细胞上的P2X7受体在强直刺激坐骨神经诱发的脊髓场电位的LTP及持续性痛的产生中具有至关重要的作用,而此作用是通过IL-1β信号通路实现的；小胶质细胞可能通过P2X7受体下游信号分子IL-18激活星形胶质细胞,参与病理性痛的维持。
吗啡是一种阿片类受体激动剂,在临床实践过程中常用于急慢性疼痛的治疗,特别是对神经病理性疼痛和癌痛的治疗。然而,患者长期反复使用吗啡将会产生对吗啡镇痛作用的耐受和依赖,其具体表现为镇痛作用下降、作用持续时间缩短、疼痛过敏及停药后疼痛加剧等,需要增加吗啡剂量才能达到耐受前的镇痛效果。由于吗啡存在上述弊端,使其临床应用受到了一定的限制。

LY294002细胞系 近些年来,学者们对吗啡耐受的机制从细胞和分子水平进行了大量研究,为临床上更加有效应用吗啡治疗疼痛提供了重要理论依据。然而,到目前为止吗啡的镇痛和耐受机制尚不完全清楚。有研究发现中枢神经系统的P2X4受体和小胶质细胞在神经病理性疼痛中充当重要作用,p38MAPK信号通道也参与其作用过程,肿瘤坏死因子和白介素1β等细胞因子以及神经递质脑源性神经生长因子对神经病理性疼痛和吗啡耐受的形成也有一定的作用。而且,最近有文献报道,吗啡能够通过P2X4受体途径对小胶质细胞的迁徙产生影响。 由于神经病理性疼痛和吗啡耐受在发生和发展上有许多共同机制,因此本研究推断P2X4R/p38MAPK可能也参与吗啡耐受的形成,并发挥重要作用。为论证上述假说,本实验拟进行一下两方面的研究：(1)吗啡耐受对脊髓和背根神经节P2X4受体表达和小胶质细胞激活的影响；(2)探讨嘌呤受体拮抗剂TNP-ATP(P1-4受体拮抗剂)和PPADS(P1,2,3,5,7受体拮抗剂)对吗啡耐受的作用及其作用机制。本研究有助于进一步揭示吗啡耐受机制,特别是P2X4受体在吗啡耐受机制中的作用,并为研制开发新型的镇痛药提供理论依据。 而且 目的 观察慢性吗啡耐受对大鼠痛阈的影响 方法 12只成年雄性SD大鼠,质量250-300g,鞘内置管成功后,随机分为2组(n=6),NS组：大鼠经鞘内置管并注入生理盐水；MOR组：大鼠并经鞘内置管注入吗啡10μg,每天两次。鞘内置管3d后,开始鞘内输注生理盐水或吗啡,鞘内注射5d后建立大鼠慢性吗啡耐受模型。 结果 与NS组比较,MOR组鞘内注射吗啡后大鼠第1天痛敏阈值明显上升,而第3,5,7天痛敏阈值逐渐下降,并在鞘内注射吗啡第7日降至最低点。 结论 连续7天鞘内注射吗啡能够导致大鼠发生慢性吗啡耐受。 目的 1.观察慢性吗啡耐受对大鼠脊髓背角小胶质细胞激活的影响 2.

5μg及以上),观察IL-17在病程的不同阶段含量是否发生变化；对桥本氏甲状腺炎患者的甲状腺的局部病理表现与IL-17表达的相关性进行了分析。 为进一步了解碘剂在桥本氏甲状腺炎发病中的作用,我们以不同水平碘剂(0,1500,6000,12000,24000μg/L)配合小鼠甲状腺球蛋白皮下免疫的小鼠甲状腺炎模型对碘剂的作用进行了初步的探讨。C57小鼠随机分组后,给予不同剂量的碘剂饮水三个月后,再以小鼠甲状腺球蛋白Tg进行皮下免疫诱发免疫反应,利用RT-PCR以及实时定量PCR技术对小鼠脾脏的IL-17以及IFN-γ含量进行检测,了解辅助性T细胞的分化情况；利用流式细胞技术对小鼠脾脏调节性T细胞的分布进行了检测,观察不同剂量的碘剂对于免疫系统以及免疫反应的影响。

selleck化学 结果：桥本氏甲状腺炎患者甲状腺组织中Th17细胞比例明显多于正常甲状腺组织,而桥本氏甲状腺炎患者血清IL-17、IL-6、IL-1p的含量亦明显高于正常对照组；且随着疾病进程的发展,甲状腺功能的逐步丧失,血清IL-17的含量逐步下降。IL-17特异性的表达于HT患者甲状腺组织中,且呈非匀质分布,病理切片显示：IL-17的表达与甲状腺纤维化呈正相关。 不同碘剂浓度喂养下的自身免疫性甲状腺炎小鼠,其脾脏IL-17的含量较对照组相比均升高；同时,IL-17与IFN-γ的表达情况呈反比,即：随着服用碘剂剂量的增加,IL-17的表达情况呈下降趋势,而IFN-γ的表达随着碘剂剂量的增大而逐渐上升；同时,随着碘剂剂量的增加,小鼠CD3+Foxp3+的调节性T细胞含量逐渐降低。 结论：IL-17可能在HT发病的初期参与自身免疫过程的发病,局部IL-17的表达与局部纤维化程度相关。碘剂对于免疫系统因剂量不同而具有双重作用：高剂量碘环境下可以促进Th1细胞反应；而低剂量碘剂可以促进Th17细胞的分化。甲状腺局部由于组织特殊性,呈现高碘状态,促进Th1细胞分化,进而造成以Th1细胞介导的甲状腺局部组织炎症破坏,纤维化的病理表现为主的不均质组织破坏；而在外周免疫系统中,低剂量碘剂促进Thl7细胞的分化,促进系统炎症的加强,促进甲状腺炎的发生

目的：肿瘤炎症一直以来被认为是促进肿瘤发生和发展的关键因素。肿瘤部位的肿瘤炎症调节机制复杂,包括细胞因子网络,微小RNA,小分子物质或者微颗粒(micorparticles, MPs)的释放等等,但这些机制均未被充分阐明。近年来发现,肿瘤细胞通过自身表达Toll样受体(Toll-like receptor, TLR),促进肿瘤的发展和转移,介导肿瘤部位的肿瘤炎症。但是,TLR信号是否同样具有负性调节肿瘤炎症的作用不得而知。同时,近年来发现肿瘤细胞可以在受到刺激或者凋亡时通过微颗粒的释放,调节肿瘤微环境的免疫反应。本研究通过对小鼠肝癌细胞的TLR的信号通路以及其所产生的生物学效应,探讨TLR4信号对于微颗粒的释放的影响,以及其在肿瘤局部炎症中的负性调节作用。 Bcl-2抑制剂 材料和方法：首先利用TLR4受体的特异性刺激物脂多糖(LPS)刺激小鼠肝癌细胞系H22,利用流式细胞技术检测H22细胞在刺激下的微颗粒释放情况以及其可能的介导机制；再通过微小RNA基因芯片技术,分析微颗粒中包含的内容物的微小RNA的表达情况,寻找差异最大的微小RNA。最后,在体内和体外实验下,观察TLR4信号通路下释放的微颗粒所产生的生物学效应以及其中微小RNA的“生物传递”作用。

BMN 673体外 结果：在LPS刺激作用下,H22细胞释放微颗粒的数目明显增多。TLR信号可以通过MyD88通路向下传递信号到细胞骨架蛋白,使得肌动蛋白轻链磷酸化,导致微颗粒的释放增多。而肿瘤部位的巨噬细胞在吞噬肿瘤来源的微颗粒后,下调表达炎症因子白细胞介素-6(IL-6)。微颗粒的微小RNA芯片分析以及实验室验证,发现微小RNAlet-7b大量存在于肿瘤来源的微颗粒中。双光子共聚焦显微镜观察到巨噬细胞可以吞噬这种肿瘤来源的微颗粒,进而微颗粒将微小RNA-let-7b由肿瘤细胞传递到巨噬细胞中,下调巨噬细胞白细胞介素-6的表达。 结论：炎症信号TLR可以通过微颗粒的释放,将微小RNA let-7b传递入巨噬细胞,进而负性调节肿瘤局部炎症。
目的： 1.研究无血清培养法和免疫磁珠分选法用于人骨肉瘤类肿瘤干细胞的分离培养,探讨两者作为分选方法的可行性。 2.研究Nanog在人骨肉瘤及其类肿瘤干细胞的中的表达及意义。 3.研究LY294002对人骨肉瘤类肿瘤干细胞增殖和细胞周期的影响,并初步探讨其抑制增殖作用可能的机制。 4.研究LY294002对人骨肉瘤类肿瘤干细胞凋亡的影响,并初步探讨其诱导凋亡作用可能的机制。 方法： 1.无血清培养法分离人骨肉瘤类肿瘤干细胞；免疫磁珠分选CD133+CD44+人骨肉瘤细胞；免疫组织化学法鉴定人骨肉瘤类肿瘤干细胞CD44和CD133的表达情况；蛋白印迹法检测骨肉瘤及其类肿瘤干细胞Nanog的表达并进行半定量分析。 2.实验分组：LY294002在培养基中的浓度分别为0μmol/L(对照组)、5μmol/L、15μmol/L和45μmol/L。 3.CCK-8法检测人骨肉瘤类肿瘤干细胞在不同LY294002浓度下的增殖情况；碘化丙啶PI染色流式细胞术检测人骨肉瘤类肿瘤干细胞在不同LY294002浓度下细胞周期的变化；蛋白印迹法法检测人骨肉瘤类肿瘤干细胞在不同LY294002浓度下总AKT、磷酸化AKT和β-肌动蛋白的表达情况。 4. Annexin V/PI双染法流式细胞术检测人骨肉瘤类肿瘤干细胞在不同LY294002浓度下的凋亡情况；蛋白印迹法检测半胱天冬酶-3、活化型半胱天冬酶-3、半胱天冬酶-9、活化型聚腺苷二磷酸核糖聚合酶和β-肌动蛋白的表达情况。 结果： 1.

Here we explore possible immunogenic therapeutic strategies. Additionally extracellular stromal elements play a key role in protecting tumor cells from chemotherapies targeted at the pancreas. We describe the experimental findings and the pitfalls associated with translation of stromally targeted therapies to clinical trial. Finally, we discuss the key inflammatory signal transducers activated subsequent to driver mutations in oncogenic Kras in pancreatic cancer. We present the preclinical findings that have led to

successful early trials of STAT3 inhibitors in pancreatic adenocarcinoma.
Since the discovery 哪里 of the Hedgehog(Hh)pathway in drosophila melanogaster,our knowledge of the role of Hh in embryonic development,inflammation,and cancerogenesis in humans has dramatically increased over the selleck last decades.This is the case especially concerning the pancreas,however,real therapeutic breakthroughs

are missing until now.In general,Hh signaling is essential for pancreatic organogenesis,development,and tissue maturation.In the case of acute pancreatitis,Hh has a protective role,whereas in chronic pancreatitis,Hh interacts with pancreatic stellate cells,leading to destructive parenchym fibrosis and atrophy,as well as to irregular tissue remodeling with potency of initiating cancerogenesis.In vitro and in situ analysis of Hh in pancreatic cancer 和 revealed that the Hh pathway participates in the development of pancreatic precursor lesions and ductal adenocarcinoma including critical interactions with the tumor microenvironment.The application of specific inhibitors of components of the Hh pathway is currently subject of ongoing clinical trials(phases 1 and 2).Furthermore,a combination of Hh pathway inhibitors

and established chemotherapeutic drugs could also represent a promising therapeutic approach.In this review,we give a structured survey of the role of the Hh pathway in pancreatic development,pancreatitis,pancreatic carcinogenesis and pancreatic cancer as well as an overview of current clinical trials concerning Hh pathway inhibitors and pancreas cancer.
目的 Hedgehog信号通路的异常活化与多种肿瘤的发生、发展关系密切,Gli是该通路的重要组成部分。本研究分析Gli抑制剂GANT61对人食管鳞癌细胞OE21和KYSE-30生长抑制作用,并探讨其抗肿瘤作用机制。方法采用不同浓度GANT61处理OE21和KYSE-30细胞,MTS法检测细胞活力;实时荧光定量PCR检测GANT61作用于OE21和KYSE-30细胞后对Gli1和Gli2mRNA的影响;蛋白质印迹法观察GANT61作用于OE21和KYSE-30细胞后对Gli1、Gli2和Cyclin D1蛋白表达的影响。Transwell侵袭实验观察GANT61作用于OE21和KYSE-30细胞后对侵袭能力的影响。结果GANT61对OE21和KYSE-30细胞有明显的生长抑制作用并且呈剂量依赖性,MTS显示GANT61作用于OE21和KYSE-30细胞72h的IC50值分别为4.7和8.2μmol/L。GANT61可显著下调OE21细胞Gli1(z=-1.98,P=0.04)和Gli2(z=-1.99,P=0.

3%和71.8%,肝移植组病人的5年无瘤生存率和总体生存率分别为83.6%和89.2%。肝移植组病人的无瘤生存率明显优于肝切除组,而两组病人的总体生存率无统计学差异。将肝功能Child-Pugh 无 A级肝切除组病人分为无肝硬化组(n=44)、轻度肝硬化组(n=101)和中重度肝硬化组(n=96)。无肝硬化组肝切除病人的5年无瘤生存率和总体生存率分别为68.5%和92.5%；轻度肝硬化组肝切除病人的5年无瘤生存率和总体生存率分别为63.4%和85.9%；中重度肝硬化组肝切除病人的5年无瘤生存率和总体生存率分别为28.6%和50.4%；无肝硬化组或轻度肝硬化组肝切除病人的无瘤生存率和总体生存率与肝移植组病人比较均无统计学意义,而中重度肝硬化组肝切除病人的无瘤生存率和总体生存率均显著低于肝移植组。此外,无肝硬化组或轻度肝硬化组肝切除病人的无瘤生存率和总体生存率均显著高于中重度肝硬化组肝切除病人,而轻度肝硬化组和无肝硬化组肝切除病人的无瘤生存率和总体生存率均无统计学意义。中重度肝硬化、无肿瘤包膜、肿瘤微血管侵犯和肿瘤中低分化是影响Child-Pugh

A级单个小肝癌切除术后肿瘤复发的不良预后因素；中重度肝硬化、血小板5cm和复发肿瘤血管侵犯是影响复发性肝癌再次肝切除术后复发的独立不良预后因素；初次肝切除术后无瘤生存时间≤18个月和复发肿瘤血管侵犯是影响复发性肝癌再次肝切除术后病人长期生存的独立不良预后因素。初次肝切除术时的肿瘤分化程度、肿瘤包膜和初次肝切除术后无瘤生存时间是IM和MO复发类型的最显著鉴别因素。ROC曲线分析各个无瘤生存时间分界点对复发类型的诊断效能,当以初次肝切除术后无瘤生存时间18个月作为诊断复发类型的时间分界点时(初次肝切除术后18个月内复发者诊断为IM,18个月以外复发者诊断为MO),其诊断效能最高,诊断敏感性为86.5%,诊断特异性为88.9%。

STI571制造商 结论：MO病人再次肝切除术后的长期生存疗效明显优于IM病人。初次肝切除术后无瘤生存时间18个月的时间分界点对鉴别肝癌复发类型(IM、MO)具有重要临床意义。对初次肝切除术后18个月以外复发者,应首选再次肝切除术治疗,而对初次肝切除术后18个月以内复发者,则应首选非外科手术治疗。 第三部分PARP-1抑制剂PJ34和HDAC抑制剂SAHA协同抑制肝癌细胞增殖的实验研究 目的：分子靶向治疗是晚期肝癌的有效治疗手段之一。本研究旨在探讨联合应用分子靶向药物,PARP-1抑制剂PJ34和HDAC抑制剂SAHA,对抑制肝癌细胞增殖是否具有协同作用。 方法：选取明显表达PARP-1的人肝癌细胞株HepG2、Hep3B、HCC-LM3和人正常肝细胞株L02作为研究对象,分别予不同药物(PJ34、SAHA、PJ34+SAHA)处理各组细胞。采用CCK-8试剂盒检测各组细胞增殖,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡。HepG2细胞接种于裸鼠皮下形成皮下种植瘤动物模型并予不同药物处理(PBS、PJ34、

无 SAHA、PJ34+SAHA),研究各组药物对裸鼠皮下种植瘤生长的抑制作用。 结果：PJ34和SAHA对肝癌细胞株HepG2的细胞增殖均具有抑制作用,且其抑制HepG2细胞增殖具有剂量依赖性。8μmol/L PJ34和1μmol/L SAHA对正常人肝细胞株L02均无明显细胞毒作用,但8μmol/L PJ34和1μmol/L SAHA对肝癌细胞株HepG2、 Hep3B和HCC-LM3的细胞增殖均具有协同抑制作用,其药物相互作用指数(CDI)分别为0.67、0.81和0.76(CDI<1表示协同作用)。联合应用PJ34和SAHA的HepG2细胞凋亡率明显高于单独应用PJ34或SAHA,差异具有统计学意义(p
第一部分肝细胞性肝癌患者HGF/c-Met表达特征评价 目的：检测原发性肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)患者血清肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF)水平及HCC组织c-Met蛋白表达水平。 方法：通过双抗体夹心酶联免疫ELISA方法检测血清标本中HGF水平,通过免疫组织化学方法检测肝脏病理标本c-Met蛋白染色强度。对肝癌组与肝硬化组及健康人群组在HGF水平、c-Met染色强度等变量进行One-Way ANOVA统计分析和Friedman非非参数检验,评价肝癌组与其他两组间是否存在显著性差异。 结果：血清HGF浓度在肝癌组、肝硬化组和正常对照组分别为0.609±0.134ng/ml、0.378±0.116ng/ml、0.271±0.083ng/ml,肝癌组患者血清HGF水平明显高于肝硬化组和正常对照组,差异具有显著性(P<0.01)。不同体积的肿瘤之间血清HGF水平存在显著性差异(P<0.05),肿瘤体积越大则血清HGF水平越高。c-Met蛋白在HCC组织上呈阳性表达,c-Met阳性染色主要定位于肿瘤细胞的胞膜和胞质,而在癌旁组织及正常组织呈弱阳性和低表达,差异具有显著性意义,P<0.

1)、DAVID(Database for Annotation. Visualization, and Integrated Discovery, v6.7、GSEA(Gene Set Enrichment Analysis,v3.7),分别对ALK融合型NSCLC和非ALK融合型NSCLC表达谱芯片数据集进行数据挖掘,参考数据库为GO、KEGG等,并应用文献自主挖掘系统对pubmed上可检索到的文献(仅针对摘要内容)进行了初步的挖掘与筛选,以寻找组间差异表达基因,并对其生物学行为过程、分子生物功能、信号转导通路等领域进行了基因集富集和聚类分析。

结果 EML4-ALK融合型与野生型NSCLC相比存在83个差异表达基因,其中30个基因出现表达水平的显著上调；53个基因出现显著下调。这些差异表达基因经注释和富集分析,涉及5个生物学过程和4条信号转导通路。 结论 差异表达基因间具有一定的“相关性”,很少出现单个或是几个基因参与某个生物过程。EML4-ALK融合型肺癌形成并非某个分子的生物学行为,上述这些基因功能和信号转导通路的变化相互交错、互相影响,最终构成了EML4-ALK融合型NSCLC区别其他肺癌的分子基础。 第二部分EML4-ALK信号通路关键基因STAT3的初步功能验证 第一章STAT3表达产物的蛋白质相互作用网络构建 目的 将与STAT3基因产物相互作用的蛋白质构建相互作用网络,以此为依托探索其中的核心蛋白STAT3在EML4-ALK融合型肺癌中的作用。以期从蛋白质相互作用水平阐述STAT3勺异常与该型肺癌的联系。 材料与方法 以EML4-ALK融合型肺癌和野生型肺癌差异表达基因为基础,应用cytoscape(v2.8)软件系统构建蛋白质相互作用网络,在蛋白质数据库SWISS-PORT、HPRD中检索相关蛋白质相互作用并结合文献数据挖掘构建与STAT3基因产物相互作用的网络,对STAT3在肺癌参与的信号通路进行富集分析,并与EML4-ALK出现异常的生物学行为和信号转导网络进行比对。 时间 结果 以肺癌中与STAT3存在相互作用的蛋白质为基础,构建蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction, PPI)。之现113个蛋白与STAT3相互作用,涉及至少23条与肺癌显著相关的生物学过程、分子功能及信号转导通路；将其进行功能聚类后与EML4-ALK融合型肺癌中出现异常表达的基因集求交集(与非ALK融合型非小细胞肺癌比较,ALK融合型肺癌存在83个异常表达基因。见第一部分第二章结果部分),发现STAT3调节的ALK、GHR两个分子在EML4-ALK型肺癌中异常表达；STAT3参与调节的Wnt通路在EML4-ALK融合型肺癌中也表达失调。

Venetoclax数据表 结论 STAT3通过与ALK的直接相互作用,可能参与EML4-ALK融合型肺癌的发生与增殖；该基因调节的Wnt等信号通路在EML4-ALK融合型肺癌中亦存在异常。这些发现揭示了STAT3在EML4-ALK融合型肺癌中的重要作用,有必要对STAT3基因的功能在EML4-ALK融合型肺癌中的作用进行进一步验证。 第二章模式细胞中STAT3的表达对其生物学特性的影响 目的 根据生物信息学分析,STAT3在EML4-ALK融合型肺癌中发挥了重要的信号转导功能。本研究应用表达载体介导的RNAi技术及分子克隆技术,构建STAT3干扰或过表达载体并通过在模式细胞中控制该基因表达,探索EML4-ALK融合型肺癌中沉默或上调STAT3信号通路后肿瘤细胞生物学行为的改变。

方法 细胞培养：复苏表达EML4-ALK融合基因的人肺腺癌H2228及EGFR/K-RAS野生型肺腺癌细胞株H1299,并用含10%胎牛血清的RPMI1640传代培养。 确定shRNA-STAT3序列：根据Genebank中检索到人STAT3全长开发读码框(open reading frame, ORF),调取3条不同的RNAi Consortium数据库中经商业验证的shRNA-STAT3序列,并进行BLAST验证比对。 重组载体pSilencer4.1_CMV_STAT3的构建与鉴定：以这三条验证有效的siRNA干扰序列为基础,遵从Ambion公司提供的pSilencer4.1_CMV载体构建说明,将其设计为特异性的shRNA-STAT3单链模板。将合成的3对单链寡核苷酸经HPLC纯化、等比例混合退火后,与经BamHI和Hind Ⅲ双酶切线性化的pSilencer4.1_CMV按说明书建议比例以T4DNA连接酶16℃过夜连接；环化成功的质粒转化DH5a;以Amp筛选阳性克隆并挑取之,然后过夜摇菌扩增；小提质粒双向测序鉴定；中提并纯化成功构建的干扰质粒pSilencer4.1_CMV_STAT3,分装备用。 克隆STAT3基因：根据Genebank检索到人STAT3基因最长转录本的开发读码框(open reading frame, 因为 ORF),设计带有酶切位点的引物,以H2228细胞总cDNA为模板进行扩增 重组质粒pcDNA3.1+STAT3的构建及鉴定：将模板扩增PCR产物纯化后与克隆载体pMD-18T连接,转化感受态、筛选阳性克隆并扩增；抽提质粒行双向测序等鉴定。中提并纯化重组质粒,分装保存等步骤获取重组载体pcDNA3.1+STAT3。 瞬时转染：应用Roche Fugene6转染系统,将重组质粒和对照质粒转染人肺腺癌细胞株H2228和H1299。 基因沉默效果检测：Real Time qPCR及Western Blotting检测各组细胞中STATS及其他肺癌中的关键通路蛋白表达状态。 基因沉默后生物学特性改变：流式细胞仪Annexin V/PI双标记法检测细胞的凋亡指数。 结果 STAT3基因特异性沉默效果检测：用Western Blotting检测siRNA-STAT3-1和shRNA-STAT3-2干扰效果,具体分为5组：shRNA-STAT3-1、shRNA-STAT3-2、 shRNA-scrambled、vector和空白。在模式细胞株H2228中,STAT3蛋白表达下调分别为64±2.3%和52±3.7%,ERK1/2和AKT及相应的磷酸化程度无明显变化,：nTOR出现了表达下调,其磷酸化水平呈显著降低；在模式细胞H1299中,shRNA-STAT3-1、shRNA-STAT3-2分别使其STAT3表达下调65±3.1%和55±4.2%, ERK1/2, AKT,mTOR及对应的磷酸化蛋白无显著变化。scrambled、 vector和Fugene6三个对照组未造成STAT3表达水平在各细胞系的显著变化。 生物学特性的变化：干扰48小时后,Annexin V/PI双标记法检测发现H2228组右下象限凋亡早期细胞比例增高；H1299无显著变化。 STAT3基因过表达效果检测：用Real Time qPCR检测pcDNA3.1+STAT3转染H2228后的表达水平,具体分为3组：pcDNA3.

通过分析不同参数下使用水热法制备出的掺锶种植体表面的表征,推导掺锶纳米表面形成的机理。 2.通过体外细胞实验,研究掺锶种植体和非掺锶种植体对前成骨细胞、骨髓间充质干细胞增殖、分化以及体外成骨的影响。 一般 3.通过体内植入实验,研究掺锶和非掺锶种植体周围早期骨组织形态学改变及对骨髓间充质干细胞行为的影响。 研究方法： 1.根据不同的Sr(OH)2水热液浓度、水热温度、时间制备出一系列掺锶二氧化钛种植体表面。使用扫描电镜、透射电镜、X射线衍射、X射线光电子能谱分析、接触角等方法分析掺锶二氧化钛种植体表面的表征。 2.在掺锶种植体和非掺锶种植体表面培养前成骨细胞(MC3T3-E1)及骨髓间充质干细胞(BMSC),一定时间点下检测增殖能力、粘附能力、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(OC)释放、关键成骨基因表达、钙盐沉积量来评价体外细胞在不同表面的增殖和分化能力。 3.掺锶种植体和非掺锶种植体植入SD大鼠股骨干骺端,6天后取出,扫描电镜下观察种植体表面形貌,种植体周骨组织进行HE染色及Stro-1免疫组化标记,分析早期骨愈合能力及不同种植体对骨髓间充质干细胞招募的影响。 结果： 1.水热液浓度、水热温度、时间可显著影响种植体表面形貌和表面物质成分、晶型。 2.掺锶种植体可释放锶离子长达一周以上,与非掺锶种植体相比可显著的促进细胞分化,上调成骨相关基因的表达,增加体外钙盐沉积(P
丝裂原激活蛋白激酶(MAPKs)也称为细胞外信号调节蛋白激酶(ERKs)是一种细胞质/细胞核内丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,可以将细胞的胞外信号转导至胞内引起细胞反应的一类重要信号系统。在哺乳动物中,ERKs广泛参与细胞生长、分化、生殖、凋亡、应激等多种生理过程。在雄性生殖方面,ERKs参与调节精子发生、精子活力、超活化和顶体反应。为了探究ERKs在中华绒螯蟹生殖相关功能的调节作用,我们从成功中华绒螯蟹的精巢中获得了ES-ERK基因cDNA全长序列。ES-ERK基因的ORF为1098bp,编码365个氨基酸,相对分子量大小约为42KD。生物信息学分析发现ES-ERK蛋白具有ERK

此网站 MAPK蛋白激酶结构域,在结构域内存在ES-ERK蛋白特有的双磷酸化位点T-E-Y基序。系统进化树分析发现,ES-ERK蛋白首先与拟穴青蟹等非脊椎动物聚类,再与脊椎动物依次聚类,符合生物学进化的规律。实时荧光定量PCR和western blotting检测分析发现ES-ERK在中华绒螯蟹不同组织和不同发育阶段的精巢中均有表达。与其他组织相比,ES-ERK在精巢中的表达量相对较高。在不同发育阶段的精巢中,ES-ERK的表达量在精细胞期逐渐增加,在成熟精子期达到峰值。Western

blotting检测ES-ERK总蛋白有类似的表达情况,而磷酸化的ERK 许多 (p-ERK)则在精细胞期的表达量高于精子期。这表明,ES-ERK可能与精子成熟相关。利用免疫荧光检测发现,p-ERK和ERK均分布在中华绒螯蟹输精管内成熟精子的细胞核及头帽处。此外,我们用台盼蓝和苏木精曙红染色以确定中华绒螯蟹顶体反应过程(AR)精子的结构变化。整个顶体反应分为四个阶段：1)头帽凸起阶段；2)顶体囊外翻阶段；3)顶体管前伸阶段；4)完成顶体反应阶段。体外诱导发生AR后,我们发现ES-ERK在整个过程中均有分布,且ES-ERK由精子的细胞核移位到顶体管尖端。这个结果表明了ERK MAPK可能参与了中华绒螯蟹精子顶体反应的调节作用。
研究目的:观察在泡球蚴肝脏组织中Smad2和P38MAPK的表达,并分析二者在肝纤维化进程中的作用及其相互关系。研究方法:将20例经手术治疗的肝泡状棘球蚴病肝组织匹配后分为两类:邻近病变的组织(即病灶旁)与正常肝组织。利用IHC的方式检测Smad2及P38MAPK的表达情况。苏木素-伊红和马松染色,光镜下观察病理改变与肝纤维化程度。结果:1,泡球蚴肝脏病灶旁组织比正常肝组织纤维化程度高。2,Smad2和P38MAPK在病灶旁组织均比正常肝组织的表达明显较高。3,Smad2和P38MAPK无论在正常肝组织,病灶肝组织,还是整个肝组织中,其表达水平均与纤维化程度正相关;随着纤维化程度的加重,Smad2和P38MAPK的表达水平也都相应增加。4,病灶旁组织中Smad2和P38MAPK的表达成正相关。结论:1,泡球蚴肝脏病灶旁组织比正常肝组织纤维化程度明显严重。2,Smad2和P38MAPK均介入泡球蚴引起肝纤维化的机制中。3,在病灶旁组织中,P38MAPK参与调控对Smad2的正向调节。
MAPK

(Mitogen-activated protein kinases)信号通路是真核生物信号传递网络中的一条重要的途径。P38 MAPK信号通路是MAPK四条信号通路之一,由一系列丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶组成,具有响应炎症因子等外界刺激的重要作用。在哺乳动物的研究中已经证实,p38 MAPK信号通路在调控细胞周期、细胞分化、细胞凋亡、囊胚发育、炎症反应和肿瘤细胞的生长迁移等生理过程中发挥了重要作用。本文以中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)精巢和副性腺转录组数据中获得的p38基因部分片段为基础,采用RACE技术对5’端和3’端序列分别进行克隆,通过序列拼接首次获得了中华绒螯蟹p38基因(E.

01)、SCr显著升高(P<0.05)。②肾脏病理显示三个对照组(NCG、LCG和SCG)小鼠肾脏结构无明显异常,但两个环孢素模型组小鼠肾小管结构不同程度损伤,间质炎性细胞增多,蓝色胶原染色不同程度增多,CMG组小鼠肾脏病变尤其明显。③三个对照组肾脏Hyp水平无明显差异,但两个环孢素模型组肾组织Hyp水平明显增多(P<0.01),IMG组Hyp低于CMG组(P<0.01),突出表达于小管间质,IMG组上述因子免疫着染程度低于CMG组(尸<0.01),ILK表达上调低于CMG组(P<0.01),但IMG组ILK表达上调低于CMG组(P
目的随着对基质金属蛋白酶越来越深入的认识,其在心肌梗死后心室肌重塑和恶性心律失常中所起的作用越来越引起重视。基质金属蛋白酶抑制剂有望成为治疗和预防心肌梗死后心室肌重塑和恶性心律失常的新方法,多西环素作为一种广谱的基质金属蛋白酶抑制剂,因其毒性小、半衰期长的特点在研究中广泛采用。本实验观察多西环素对缺氧大鼠H9c2心肌细胞缝隙连接蛋白43表达的影响,探讨其可能的作用机制,为冠心病的治疗提供理论依据。

无 方法采用高糖、含10%FBS的DMEM,于5%CO2培养箱37℃培养大鼠H9c2心肌细胞,用MTT法检测多西环素对大鼠H9c2心肌细胞存活率的影响。当细胞处于对数期长满80%左右时,换用低糖、不含FBS的DMEM,于含95%N2和5%CO2培养箱37℃分别缺氧处理6h、12h、24h,采用Western Blotting法检测缺氧处理6h、12h、24h后心肌细胞Cx43总蛋白的表达量,以及用基质金属酶抑制剂(多西环素10μg/ml)、P13K抑制剂(LY29400230μm/L)、ERK1/2抑制剂(U012610μm/L)分别干预缺氧H9c2心肌细胞6h、12h、24h后Cx43总蛋白表达量的变化。 selleck化学药品 结果1.用MTT法检测多西环素对大鼠H9c2心肌细胞生长的影响,结果表明,10μg/ml以下浓度的多西环素对心肌细胞生长影响不明显,而10μg/ml以上多西环素则明显抑制心肌细胞生长,且随着时间延长,该作用明显增强,呈时间、剂量依赖关系。

2.缺氧组较空白对照组Cx43总蛋白表达量明显降低(P<0.01)。缺氧6h时,多西环素干预组和U0126干预组较缺氧组Cx43总蛋白表达量明显增高(P<0.05),缺氧12h时,多西环素干预后Cx43总蛋白表达量与缺氧组比较无明显差异,U0126干预组Cx43总蛋白表达量仍较缺氧组增高(P<0.05),缺氧24h时,多西环素和U0126干预后Cx43总蛋白表达量与缺氧组比较无明显差异。LY294002干预组在观察时间范围内均较缺氧组Cx43总蛋白表达量显著降低(P
目的：探讨缺氧预处理对猪缺氧复氧冠状动脉内皮源性超极化因子(EDHF)介导的内皮舒张功能的影响及其机制。 方法：随机选取新鲜猪心9个,每只取其心外膜下冠状动脉前降支中下1/3切成4段,长2m,随机置入如下4组的环境中。对照组：冠状动脉血管环未经过缺氧/复氧处理及缺氧预处理,直接在37℃有氧条件下用KH液孵育60mmin,再平衡30min；实验组A：在4℃条件下用KH液缺氧浸泡60min后复氧30min,再按对照组的方法进行处理；实验组B：在4℃条件下用KH液缺氧浸泡5min后复氧10min,再按实验组A的方法进行处理；实验组C：在37℃有氧条件下含5-羟基癸酸甘油酯(10μmol/L)的溶液浸泡25min,再按实验组B的方法进行处理。然后采用器官槽法检测血管环在消炎痛(7μmol/L)、N-硝基-L-精氨酸(300μ/L)及氧合血红蛋白(20μmol/L)作用下,前列腺素F2α引发的血管收缩反应,及不同缓激肽浓度下EDHF引发的血管舒张反应。

结果：与对照组相比,内皮源性超极化因子引发的血管环最大舒张反应变化,实验组A、C均明显降低(P0.05)。 结论：①缺氧复氧对冠状动脉内皮源性超极化因子所介导的内皮依赖性舒张功能有损害作用；②缺氧预处理对冠状动脉内皮源性超极化因子所介导的内皮依赖性舒张功能有保护作用；③缺氧预处理能选择性开放线粒体ATP敏感的钾离子通道(mitochondria 并且 ATP-sensitive K+channel, mKATP)可能是这一保护作用的主要原因。
目的：探讨肾缺血再灌注损伤的细胞信号转导机制和α-硫辛酸(LA)对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用。 方法：健康雄性Wistar大鼠50只,随机分为5组：①假手术组(Sham组)；②缺血再灌注组(I/R组)：夹闭双侧肾蒂,45min后去夹再灌,制备缺血再灌注模型；③I/R+低剂量α-硫辛酸组(LA-L组)：缺血前24h及1h腹腔注射LA10mg/kg；④I/R+中剂量α-硫辛酸组(LA-M组)：缺血前24h及1h腹腔注射LA50mg/kg；⑤I/R+高剂量α-硫辛酸组(LA-H组)：缺血前24h及1h腹腔注射LA100mg/kg；再灌注24h后分别取血及肾组织。检测血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平;HE染色观察肾脏病理改变；测定血清丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性；免疫组化、PT-PCR检测肾小管上皮细胞JNK、c-jun、ATF-2磷酸化蛋白及mRNA的表达水平。 结果：与Sham组比,I/R组大鼠血Cr和BUN水平明显升高(P
目的：作为泌尿系统最常见的恶性肿,瘤,膀胱癌在其发生、发展以及复发过程中逃避机体免疫监督的诸多生物学行为正日益受到广泛关注。研究表明Toll样受体4(Toll-like receptor4, TLR4)在多种恶性肿瘤中存在表达并与某些肿瘤的分期分级密切相关,提示TLR4可能参与了肿瘤的免疫逃逸过程；而共刺激因子B7H1可与T淋巴细胞表面的PD-l结合并启动后者的凋亡过程,是免疫逃逸过程的重要分子。本研究的主要目的即探讨LPS介导的TLR4信号通路的活化与B7-H1表达的关系,并探讨他们参与膀胱癌免疫逃逸可能的分子机制。 方法：1.体外培养膀胱癌T24细胞系,分别以不同浓度的脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)(0.0.25、0.5、0.75、1.0、2.0μg/ml)刺激T24细胞8h,以激活TLR4信号通路。用流式细胞学方法检测T24细胞表面TLR4的表达情况；分别提取总RNA,用逆转录聚合链式反应(Reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)技术检测共刺激因子B7H1mRNA的表达情况；提取蛋白质,用Western-blot蛋白印迹技术检测B7H1蛋白质的表达情况； 2.以浓度1μg/ml的LPS分别刺激T24细胞不同时间(Oh、2h、4h、6h、8h、12h),以激活TLR4信号通路。用前述方法分别检测检测TLR4、 B7H1mRNA、B7H1蛋白质的表达情况； 3.

建立体外多巴胺诱导的黑素细胞氧化应激凋亡模型。2.对文献报道的6种具有抗氧化抗凋亡的中药成分,利用多巴胺诱导黑素细胞凋亡的体外模型,检测其对氧化应激引起的黑素细胞凋亡的保护作用。3.探讨其中对黑素细胞有保护作用的中药成分(芹黄素)对多巴胺引起的氧化应激及相关的c-Jun氨基端激酶(c-Jun

没有 N-terminal Kinase,JNK)、p38和磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)/Akt(v-akt murine thymoma viral oncogene homolog)信号转导通路的影响,初步探讨其作用机制。 方法:1.采用健康儿童包皮组织原代培养获得黑素细胞,免疫细胞化学法检测S-100蛋白,进行细胞鉴定。MTT法检测不同浓度及作用时间的多巴胺对黑素细胞活力的影响。通过Annexin-V/PI双染流式细胞术凋亡细胞比例检测及Western Blot法检测caspase3和多聚ADP-核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)的活化,观察多巴胺对黑素细胞凋亡的影响。DCFH-DA(2’,7’-dichloro?uorescin diacetate)法流式细胞术检测多巴胺对黑素细胞活性氧分子(ROS)生成的影响。2. MTT法检测芹黄素等6种中药成分预处理对多巴胺引起的黑素细胞活力降低的影响。采用Annexin-V/PI双染流式细胞术检测这6种中药成分对多巴胺诱导的黑素细胞凋亡的影响。3. Western Blot法检测筛选出的有效中药成分(芹黄素)对多巴胺引起的caspase3和PARP的活化的影响。DCFH-DA法流式细胞术检测芹黄素对多巴胺诱导的黑素细胞活性氧分子(ROS)生成的影响。4. Western Blot法检测多巴胺对黑素细胞的p38、JNK及Akt信号通路的影响。Annexin-V/PI双染流式细胞术检测p38抑制剂SB203580、JNK抑制剂SP600125、Akt抑制剂LY294002预处理黑素细胞对多巴胺促凋亡作用的影响。Western

Blot法检测芹黄素预处理对多巴胺激活的p38、JNK及Akt信号通路的影响。 结果: 1.多巴胺诱导的体外黑素细胞氧化应激凋亡模型的建立 原代培养纯化的黑素细胞,显现出黑素细胞的明显特征, S-100免疫细胞化学鉴定证实为高纯度黑素细胞。多巴胺可呈浓度依赖性和时间依赖性抑制黑素细胞活力。500μM多巴胺作用于黑素细胞12h,细胞活力下降约50%。Annexin-V/PI双染流式细胞术结果显示,不同浓度多巴胺作用于黑素细胞12h,可呈浓度依赖性增加凋亡细胞比例。Western 获悉更多 Blot结果显示,500μM多巴胺作用黑素细胞6h或12h,caspase3和PARP出现明显活化,12h组活化的PARP和caspase 3蛋白含量高于6h组。DCFH-DA法流式细胞术结果显示,多巴胺可明显增加黑素细胞ROS含量。以上结果表明500μM多巴胺作用于黑素细胞12h可明显诱导黑素细胞氧化应激和凋亡。 2.抑制黑素细胞凋亡的抗氧化中药成分筛选 根据文献报道选出具有抗氧化和抗凋亡作用的芹黄素、芍药苷、葛根素、麦角甾苷、人参皂甙Rb1和姜黄素6味中药成分。结果发现,不同浓度的6味中药成分预处理黑素细胞后,芹黄素可明显抑制多巴胺诱导的黑素细胞活力降低,减少多巴胺诱导的黑素细胞凋亡。其他中药成分在实验浓度下对黑素细胞活力和凋亡均无明显影响。

3.芹黄素对多巴胺诱导的黑素细胞氧化应激及凋亡的影响 0.3~10μM的芹黄素可呈浓度依赖性的抑制多巴胺引起的黑素细胞活力降低的作用,减少凋亡细胞比例。芹黄素预处理可降低多巴胺对PARP和caspase 3的活化,抑制多巴胺诱导的ROS生成。 4.芹黄素对黑素细胞氧化应激相关的凋亡信号通路的影响 500μM多巴胺作用于黑素细胞,p38、JNK及Akt的磷酸化蛋白含量均呈时间依赖性增加。p38抑制剂SB203580、JNK抑制剂SP600125、Akt抑制剂LY294002预处理,可明显减少多巴胺诱导的Annexin-V阳性细胞比例,证实多巴胺的促黑素细胞凋亡机制有赖于p38、JNK及Akt信号通路。而芹黄素预处理可明显抑制多巴胺激活的p38、JNK及Akt的磷酸化,说明p38、JNK、Akt信号通路参与了芹黄素的抗多巴胺诱导的黑素细胞凋亡的机制。 购买5-Fluoracil 结论: 1. 500μM多巴胺作用于黑素细胞12h可明显诱导黑素细胞氧化应激和凋亡。 2.芹黄素可抑制多巴胺诱导的黑素细胞ROS生成,减少黑素细胞凋亡。芍药苷、葛根素、麦角甾苷、人参皂甙Rb1、姜黄素在实验浓度范围内对多巴胺诱导的黑素细胞活力降低和凋亡无明显保护作用。 3.多巴胺的促黑素细胞凋亡作用有赖于p38、JNK、Akt信号通路的激活。p38、JNK、Akt信号通路参与了芹黄素的抗多巴胺诱导的黑素细胞凋亡的机制。
葡萄糖是乳汁合成的主要前体物质之一,与乳产量和乳品质密切相关。本研究围绕奶牛乳腺上皮细胞葡萄糖摄取的调控及其对乳成分合成的影响展开了以下研究：首先建立了泌乳奶牛乳腺上皮细胞模型；其次分别研究了泌乳相关激素和单糖基质对葡萄糖转运载体基因表达和葡萄糖摄取的影响；最后探讨了葡萄糖供应量对主要乳成分(乳脂和乳糖)合成的影响及其可能机制。主要研究结果如下： 1.泌乳奶牛乳腺上皮细胞模型建立及其功能检测 该部分旨在建立奶牛乳腺上皮细胞泌乳模型。试验选择DMEM/F-12培养液,用组织块培养法得到奶牛乳腺上皮细胞。为维持乳腺细胞的泌乳功能,在培养体系中添加了催乳素、胰岛素、氢化可的松、转铁蛋白等成分。根据乳腺上皮细胞和成纤维细胞对胰酶敏感度的不同,采用0.25%胰酶和0.15%胰酶加0.02%EDTA反复酶差消化,得到较为纯化的乳腺上皮样细胞。培养细胞呈单层、鹅卵石样铺展,可形成腺泡和岛屿状结构,具有上皮细胞的典型形态特征。此外,通过乳腺上皮细胞特征性细胞角蛋白18免疫细胞化学鉴定和细胞生长曲线分析,证明培养得到的细胞是正常乳腺上皮细胞。研究发现细胞传至第10代,细胞依然生长旺盛。通过细胞亚显微结构观察、乳脂形态观察、αsl酪蛋白基因表达、酪蛋白Western-blot含量检测等方法检测乳腺细胞的泌乳功能,证明培养至第10代的乳腺上皮细胞仍具有乳汁合成和分泌功能,表明本研究建立的奶牛乳腺上皮细胞培养模型可作为乳腺生理相关功能研究的模型。 2.泌乳相关激素对乳腺细胞主要葡萄糖转运载体基因表达的影响及相关信号通路研究 该部分研究了泌乳相关激素(催乳素、胰岛素和氢化可的松)单独及组合作用对GLUT1和GLUT8基因表达的影响,探讨了胰岛素调控GLUT8基因表达和葡萄糖摄取的相关信号通路。结果发现,不同浓度催乳素和胰岛素对GLUT1基因表达均无显著影响(P>0.05),高剂量催乳素可显著降低GLUT8基因表达(P<0.

05),增加大鼠穿越平台次数(P<0.05),抑制大鼠缺血脑组织p38蛋白的表达(P<0.05)。结论山楂叶总黄酮对慢性脑缺血大鼠的神经功能具有保护作用,其机制可能与抑制p38蛋白表达,减轻脑神经元凋亡有关。
血管钙化是诸如高血压、动脉粥样硬化、糖尿病及慢性肾功能衰竭等疾病的共同病理生理基础和重要危险因素之一,其发病机制尚不明确。近年来,心血管系统分泌的内源性生物活性肽在血管钙化的发生发展中发挥的作用受到越来越多的重视。然而,内源性活性多肽及其受体在血管钙化中一般作用规律和个体化调控特征尚需进一步探讨。因此,本文综述内源性生物活性肽,如皮质抑素、血管紧张素1-7、Aplin和瘦素等,在血管钙化中的作用及新进展,有助于揭示血管钙化的发病机制,从而为血管钙化的防治提供更多理论支持和思路。
目的:探讨氧化苦参碱对人子宫内膜癌细胞HEC-1-B增殖、侵袭转移的作用及其机制。方法:MTT法检测细胞增殖抑制率;Transwell小室法观察细胞侵袭转移的改变;Western

blot及Real-time PCR法检测p38、p-p38、MMP-2和MMP-9表达水平的变化。结果:一定浓度氧化苦参碱可显著抑制子宫内膜癌细胞HEC-1-B的增殖、侵袭转移,并呈时间和剂量依赖性。氧化苦参碱可显著降低HEC-1-B细胞中p38及MMPs的表达水平。联合应用SB203580能够有效增强氧化苦参碱的抗肿瘤细胞侵袭转移能力。结论:氧化苦参碱可以抑制子宫内膜癌细胞的增殖、侵袭转移,并下调p38磷酸化以及MMP2、MMP9的表达。
目的:探讨运动预处理后内源性阿片肽(EOP)对大鼠心肌缺血再灌注损伤延迟性保护作用及机制。方法:健康雄性SD大鼠75只,随机分成假手术组(sham组)、缺血再灌注模型组(I/R组)、运动预处理组(EP组)、运动预处理+纳洛酮(naloxine)组(EPN组)、运动预处理+白屈菜赤碱(chelerythrine)组(EPC)。在运动预适应模型基础上,结扎左冠状动脉前降支复制大鼠心肌缺血再灌注模型,采用多道生理记录仪描记血流动力学参数,用酶联免疫法(ELASA)检测血清心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)和心肌环氧化酶-2(COX-2),用化学比色法检测心肌诱导型一氧化氮合酶(i Autophagy inhibitor clinical trial NOS)活性,用黄嘌呤氧化法检测心肌锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活性,用原子分光光度法检测心肌中钙离子(Ca2+)浓度。结果:1与I/R组相比,EP组在再灌注期左室收缩压(LVSP)、左室内压最大上升速率(+dp/dt

max)降低幅度明显减小(P<0.05);与EP组相比,EPN组和EPC组中血清cTnⅠ值明显升高,有显著性意义(P<0.05),EPN组心肌COX-2显著降低(P<0.05),EPN组和EPC组心肌细胞胞浆中Ca2+浓度有降低趋势,但差异不显著;与EP组相比,EPN组和EPC组中心肌细胞胞浆中Ca2+浓度明显升高,有显著性意义(P<0.05)。结论:运动预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作用,内源性阿片肽可能通过蛋白激酶C(PKC)及下游信号途径减轻心肌细胞钙超载和改善微循环,发挥延迟性保护效应。
急性胰腺炎是临床常见急症重症之一,关于急性胰腺炎的病理生理学研究进展表明,这一炎症反应,伴随着局部和全身系统性的促炎和抗炎介质的释放。同时炎性因子抑制剂的应用对急性胰腺炎有较好的临床疗效,为急性胰腺炎的治疗提供了新的广阔的前景。
Tetrandrine(Tet), 那个 the main active constituent of Stephania tetrandra root, has been demonstrated to alleviate adjuvant-induced NVP-BGJ398细胞系 arthritis in rats. The present study was designed to investigate the effects of Tet on the migration and invasion of rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes(RA-FLS) and explore the underlying mechanisms. By using cultures of primary

FLS isolated from synoviums of RA patients and cell line MH7 A, Tet(0.3, 1 μmol·L-1) was proven to significantly impede migration and invasion of RA-FLS, but not cell proliferation. Tet also greatly reduced the activation and expressions of matrix degrading enzymes MMP-2/9, the expression of F-actin and the activation of FAK, which controlled the morphologic changes in migration process of FLS. To identify the key signaling pathways by which Tet exerts anti-migration effect, the specific inhibitors of multiple signaling pathways LY294002, Triciribine, SP600125, U0126, SB203580, and PDTC(against PI3 K, Akt, JNK, ERK, p38 MAPK and NF-κB-p65, respectively) were used. Among them, LY294002, Triciribine, and SP600125 were shown to obviously inhibit the migration of MH7 A cells. Consistently, Tet was able to down-regulate the activation of Akt and JNK as demonstrated by Western blotting assay.